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心肌酶譜
鎖定
- 中文名
- 心肌酶譜
- .血清酶總論
- P232
- 學 科
- 生物
- 命 名
- 習慣命名法
心肌酶譜簡介
1.血清酶總論:P232
eg:澱粉酶、蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶
ALP
對-硝基苯酚磷酸鹽對-硝基苯酚+磷酸鹽
水解
4.裂解酶類:催化底物移去一個基因而留下雙鍵的反應或逆反應的酶類。
5.異構酶類:催化各種同分異構體之間互相轉化的酶類
eg:磷酸已糖激酶,消旋酶
磷酸已糖激酶
6-磷酸葡萄糖-磷酸果糖
6.合成酶類(連接酶類):催化兩分子底物合成-分子的化合物,同時必須偶聯有ATP磷酸鍵斷裂。
心肌酶譜命名
底物+性質:穀草轉氨酶
2.系統命名法:酶反應底物、性質均要列出,各底物間以“:”隔開
編號:(1)1為氧化還原酶類
2為轉移酶類
3為水解酶類
4為裂解酶
(2)反應作用的位置,即可用於哪個基因
1.1 -CH-OH
1.2 -C=0
1.3 -C=CH
1.4 -C=NH
1.5 -CH-NH2
(3)
1.1.1 氯化還原酶 CH-OH 受體:NAD+ NADP-
1.1.2 氯化還原酶 CH-OH 受體:細胞色素
1.1.3 氯化還原酶 CH-OH 受體:分子氧
心肌酶譜去路
(一)血清酶的排泄:P234
1.尿路:是血清中低分子量酶類主要去路
2.膽汁不是血清酶排泄途徑
(二)肝或網狀內皮系統對血清酶的清除:
肝臟對以酶原形式存在的酶類有消除作用
(四)轉入其它體液
心肌酶譜活性單位
規定條件包括:温度、PH、緩衝系統、基質濃度及輔助因素
(二)酶的單位計算
1.根據標準計算:
(U/L)酶活力單位=A樣品/A標準×C標準×Vt/Vs×1/t×1000
總體積-樣品+基質
2.根據反應底物的消光係數:
酶活力=A樣品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000
消光係數 比色杯厚度
(三)血清酶的生理差異:
1.性別:男>女
2.年齡:兒童 磷酸酶>成人 嬰兒 LDH 2倍成人
3.進食:對酶活力本身無影響,但可影響比色時的濁度
4.活動:
5.妊娠:ALT、LDH、ALP↑
心肌酶譜改變機制
(一)合成異常:P238
1.合成減少
2.合成增加
(二)酶從損傷細胞中釋放增加:
是疾病時大多數血清酶↑的主要機制
(三)其它機制:
腎衰→尿少→ 血澱粉酶↑
藥物,毒物可作為酶的抑制劑
2.AST的測定:
AST 穀草轉氨酶(GOT)
一、AST分佈:
時,才釋放入血。
心肌酶譜方法學
COOH COOH COOH COOH
(CH2)2 + CH2 AST (CH2)2 + CH2
C=O HC-NH2 37℃ HC-NH2 C=0
COOH COOH COOH COOH
COOH CH3
C=0 脱羧 COOH
COOH
丙酮酸
CH3
C=0 + →丙酮酸-2.4- = +H2O
COOH 硝基苯腙
2.4-二硝基苯肼 酸性,草黃色,加鹼,棕紅色
2.正常參考值:8-28u
3.注意事項
(1)溶血標本不能用於AST測定,因為RBC中AST是血清10倍。
(2)M-AST、C-AST理化性質,Ag性均不同,由不同基因控制,但催化相同反應,是同I酶
(3)賴氏比色法簡易性,相對準確性,所以是普及的原因
(4)難以確定在酶反應期內,產物的生成與時間成正比。
(5)顯色反應及底物濃度問題。
為了減少其干擾,波長選在490-530nm,此時丙酮酸為-酮戊二酸2倍
ALT
丙酮酸+穀氨酸丙氨酸
所以肝疾病AST、ALT同時,使丙酮酸消耗,AST測定結果減低。
B、產物旁路
乳酸
LDH ↑NADH+H+
丙酮酸
↑
↓MDH+NADH+H+
所以受LDH、MDH干擾,使AST測定結果減低
(二)酶偶聯一些外連續監測法:
1.原理:L-天門冬aa.+α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+谷aa.
草酰乙酸+NADH+H+ MDH L-蘋果酸+NAD+
340nm
吸光度下降值,計算AST活力
2.參考值:男<40u/L 37℃
女<35u/L 37℃
3.注意事項:
(1)採血後立即分離血清,避血溶血
血清與血塊不可長時間設置在一起
(2)血清,室温4-8h,2-6℃ 7d -20℃ 8月 活力不變
(3)抗凝劑血漿:
不能用草酸鹽抗凝劑,因為可抑制AST活性
(4)AST濃度過高,稀釋重做。
(5)不存在偶聯轉氨作用和產物旁路問題
(6)不存在 酮戊二酸干擾,可適當提高底物濃度使反應完全
(7)底物中存在穀氨酸脱氫酶(GLDH)
α-酮戊二酸+NADH+H++NH3 GLDH 谷aa.+NAD++H2O
消耗NADH+H+,使結果偽性增高。
(8)轎清中丙酮酸LDH
丙酮酸+NADH+H+ LDH 乳酸+HAD+
消耗NDAH+H+,使結果偏高
(9)在指示酶作用有,草酰乙酸可自動脱羧生成丙酮酸,使結果偏低。應加LDH,使之成為乳酸,從而更加準
確反映AST活力。
所以MDH、LDH共同作為指示酶
三、臨牀意義:
1.AST在心肌中含量最多,所以在急性心梗時6-12h↑,48h達高峯,3-5d恢復正常
3.急性肝炎,AST,ALT同時↑,可達正常值10-30倍,黃疸前期就已↑,有助於臨牀早期診斷。
3.AST同I 酶:
<黃>血清酶測定時診斷心梗的意義:
心肌C、肝C出現實質性損害 M-AST C-AST↑
4.血清乳酸脱氫酶的測定: 原理 PH對其影響
有五種同I酶LDH1-LDH5
一、LDH分佈和特點:
廣泛分佈,主要在腎,其次心,骨骼肌,其它肝、脾、胰、肺,上述組織病變,血清中LDH。主要催化以下反應:
L-乳酸+NAD+ 丙酮酸+NADH+H+
PH鹼 正反應(L-P)
PH中性 逆反應(P-L)
二、方法學
(一)比色法:P122
1.原理:L-乳酸+NAD+ LDH 丙酮酸+NADH+H+
PH8.8
丙酮酸+2.4-二硝基苯肼 → 丙酮酸-2.4-二硝基苯腙
酸 草黃色
加NaOH 棕紅色
顏色越深,酶活力越大
2.參考值:225-540u/dL
3.注意事項:產物生成量與反應時間不成比例
(1)標本嚴禁溶血 因為RBC內LDH活力是血清內的100倍。
(3)血清標本2-6 數天,室温48h
LDH組成差異大,所以很難找出LDH最適反應條件。eg:心梗LDH1↑,肝病LDH5↑
(5)結果>2500u/dL,將標本稀釋重做。
(二)連續監測法(酶法):P120
1.原理:L-乳酸+NAD+ PH8.8-9.8 丙酮酸+NADH+H+
LDH
丙酸酸+NADH+H+乳酸+NAD+
PH7.4
340nm處監測,吸光度下降幅度與LDH成正比。
2.參考值:240-460u/L 37℃
3.注意事項:
(1)逆反應優點:
a.試劑用量少,所需NAD+,只是L-P所用NADH+H+的3%,樣品少
c.酶活力隨時間的線性關係較長
(2)正反應優點:
a.NADH+H+比NAD+穩定,價格低,易得到純品。
底物L-乳酸與逆反應底物丙酮酸穩定
b.L-乳酸對LDH的抑制低於丙酮酸對LDH的抑制
(3)連續監測法可利用正、逆反應,優於比色法。
(4)金屬離子的存在可以降低NAD+穩定性
試劑中可加入EDTA,使EDTA絡合金屬離子,增加NAD+穩定。
鹽緩衝液中穩定。
(6)某些批號的NADH+H+還有LDH的物質,使用前檢查NADH+H+質量,NADH+H+溶於Tris緩衝液,分別在
(8)標本不能溶血
三、臨牀意義:
2.心梗:12-24h,LDH↑,48-72h達高峯,1-2W後恢復正常
3.惡性腫瘤晚期LDH,惡性腫瘤引起的胸腹水中LDH↑
小分子肽類。
低PH值也可抑制LDH活性。
5.尿毒症患者LDH正常,透析後LDH↑,因為體內尿素較高