-
血乳酸
鎖定
- 中文名
- 血乳酸
- 外文名
- Blood Lactic Acid
- 分 類
- 血液生化檢查、氨基酸、氮化物
- 原 理
- 全血乳酸測定,血漿乳酸測定
- 含 義
- 體內糖代謝的中間產物
- 作 用
- 提示潛在疾病的嚴重程度
血乳酸醫學檢查
血乳酸分類
血乳酸原理
(1)全血乳酸測定(分光光度法):在NAD存在下,LDH催化乳酸脱氫,氧化成丙酮酸。加入硫酸肼使丙酮酸不斷被轉換消除,並促進反應完成。反應完成後生成的NADH與乳酸為等摩爾,在340nm波長下測定NADH的量,計算乳酸的含量。
[2]
(2)血漿及血清乳酸測定(比色法):以氧化型輔酶Ⅰ(NAD)作氫受體,LDH催化L-乳酸脱氫,生成丙酮酸,NAD轉變成還原型輔酶Ⅰ(NADH)。酚嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)將NADH的氫傳遞給氯化硝基四氮唑藍(NBT),使其還原。在530nm波長的吸光度與乳酸含量呈線性關係。
[2]
血乳酸試劑
(1)全血乳酸測定(分光光度法):
[2]
②30g/L偏磷酸:稱取3.0g MPA,溶於蒸餾水中,並稀釋到100ml,新鮮配製。
③Tris-硫酸肼緩衝液,pH9.6(Tris 79mmol/L;硫酸肼400mmol/L);取1mol/L氫氧化鈉350ml,加入Tris 4.79g,硫酸肼26g,EDTA-Na2 0.93g,以1mol/L氫氧化鈉調至pH 9.6,用蒸餾水稀釋到500ml,4℃保存可穩定8天。
④27mmol/L NAD溶液:根據需要量稱取NAD溶於蒸餾水中,4℃可穩定48h。
⑤LDH溶液:取LDH原液,用生理鹽水稀釋成1500U/ml(如用SigmaⅢ型LDH,該製品從牛心提製,每毫升含10mg蛋白,每毫克蛋白具有LDH活性400~600U,用鹽水稀釋成3mg/ml蛋白即可)。
(2)血漿及血清乳酸測定(比色法):
[2]
①0.1mol/L Tris-HCl緩衝液(pH 9.0):取Tris 12.12g,溶於約800ml蒸餾水中,加入TritonX-100 40ml,混勻,以1mol/L鹽酸調節至pH9.0,蒸餾水稀釋至1L。
②無乳酸蛋白液:取Sephadex G25,用蒸餾水充分溶脹後裝柱。層析柱內徑16mm,裝柱高360mm。有蒸餾水反覆流洗後,取20ml肝功能試驗正常的混合血清上柱,用蒸餾水洗脱。待洗脱物開始出現混濁時收集,共收集20ml,加入少許氯化鈉(約0.1g)及疊氮鈉20mg,置冰箱保存。按本法測定乳酸(即無乳酸蛋白液代替標本進行測定),測定管與對照管吸光度之差應小於0.015。可按100ml上述緩衝液加無乳酸蛋白液5ml,混合後置冰箱保存。
③乳酸脱氫酶溶液:用全血法。
⑤呈色劑:溶解NBT82mg於20ml蒸餾水中,可稍加熱助溶,不溶物需離心去除。再加入NAD200mg,最後中入PMS 5mg,混合後置棕色瓶中,4℃保存,至少可用6個月。
血乳酸操作方法
(1)全血乳酸測定(分光光度法)①應在空腹及休息狀態下抽血。不用止血帶,不可用力握拳。如用止血帶,應在穿刺後除去止血帶2min後再抽血。最好用肝素化的注射器抽血,抽取後立即注入預先稱量的含冰冷蛋白沉澱劑的試管中。如用血漿測定,每毫升血用10mg氟化鈉及2mg草酸鉀抗凝,立即冷卻標本,並在15min內離心。
[2]
抽血前試管編號,稱重(Wt)並記錄。加入6ml MPA(50g/L),再稱重(Wm)後放入冰浴中,每份標本最好作雙管分析。抽血後,立即注入上述試管中,每管2ml。顛倒混合3次,不可產生氣泡。待試管温度與室温平衡後,再稱重(Wb)。靜置至少15min後,離心沉澱(400r/min,15min)。上清液必須澄清。計算稀釋因數D:
D=Wb-Wt/Wb-Wm
③本法線性範圍達5.6mmol/L(50mg/dl)。
④本法不用過氯酸作蛋白沉澱劑。
⑤一般乳酸鋰未標明L-或DL-者,均為DL-型,L-型乳酸鋰價格昂貴。
①本法條件下,NBT還原生成物在反應液中十分穩定,無混濁和沉澱,吸光度久置不變。
③加入蛋白質對反應及生成物溶液的穩定是必要的。同時加入蛋白質及表面活性劑,可提高靈敏度及穩定性。Brij-35和TritonX-100有同樣效果。人血清白蛋白中含乳酸濃度較高,不適用。因人血清白蛋白的顯色強度平均較牛血清白蛋白高1.06倍,如用牛血清白蛋白,且僅加於標準管中時,標準管吸光度須乘此數。
④無乳酸蛋白液可與緩衝液預先混合後再加入1ml,代替表2中分別加入。
⑤本法線性範圍達8.0mmol/L(73mg/dl)。
⑥吸光度隨孵育時間延長而增加,必須準確10min。加入0.1mol/L鹽酸後吸光度不變。
血乳酸正常值
血乳酸臨牀意義
組織嚴重缺氧可導致三羧酸循環中丙酮酸需氧氧化的障礙,丙酮酸還原成乳酸的酵解作用增強,血中乳酸與丙酮酸比值增高及乳酸增加,甚至高達25mmol/L。這種極值的出現標誌着細胞氧化過程的惡化,並與顯著的呼吸增強、虛弱、疲勞、恍惚及最後昏迷相聯繫。即使酸中毒及低氧血癥已得到處理,此種高乳酸血癥常為不可逆的。見於休克的不可逆期、無酮中毒的糖尿病昏迷和各種疾病的終末期。
[2]
血乳酸安全
- 參考資料
-
- 1. Lactic Acid, Blood Lactate & The Lactic Acid Myth .sports fitness advisor[引用日期2016-09-01]
- 2. Lactic acid test .medlineplus[引用日期2016-09-01]