生物化學實驗

本書共分三篇，分別是生物化學實驗室規則及基本操作、基本生化實驗技術、實驗部分。在第二篇中，特別對基本生化實驗技術理論進行了較詳實的介紹，以期使用者能夠掌握生化實驗的背景和原理，在做實驗的同時使自己的專業理論水平真正得到提高。在第三篇中，特別注意編排的實驗內容的全面性，廣泛選取了生化實驗中較為成熟的糖類、脂類、氨基酸和蛋白質類、核酸類、酶類、維生素類和代謝類實驗，以及免疫學實驗，因此本書可以作為一本實用的生化實驗手冊使用。

本書可作為高等院校動物科學、動物醫學、食品科學、發酵工程、衞生檢驗、生物技術、化工、環保等專業的實驗教材,也可供相關專業的學生、教師和科技工作者參考。 ^[1] 

第一篇生物化學實驗室規則及基本操作1

1實驗室規則1

2預習報告要求1

3實驗記錄要求1

4實驗報告書寫要求及參考格式2

4.1實驗報告的格式2

4.2實驗報告的內容2

4.3實驗結果3

5儀器的清洗與清潔3

5.1初用玻璃儀器的清洗3

5.2使用過的玻璃儀器的清洗3

5.3石英和玻璃比色皿的清洗3

5.4塑料器皿的清洗3

5.5玻璃和塑料器皿的乾燥4

6清洗液的配製及使用4

6.1鉻酸洗液的配製4

6.2其他洗滌液4

7移液器的種類和使用4

7.1滴管4

7.2移液管(吸管)5

7.3微量進樣器5

7.4自動取液器5

8定量容器的種類和使用6

8.1量筒、量杯6

8.2容量瓶7

9溶液的混勻7

9.1攪拌7

9.2旋轉7

9.3彈打7

10實驗室意外情況及處理措施8

10.1着火8

10.2爆炸8

10.3中毒9

10.4外傷9

10.5觸電10

第二篇基本生化實驗技術11

1分光光度技術11

1.1紫外和可見光光譜11

1.2熒光光度分析17

1.3原子吸收光譜18

2電泳技術19

2.1電泳技術總論19

2.2紙電泳和乙酸纖維薄膜電泳23

2.3聚丙烯酰胺凝膠電泳23

2.4瓊脂糖凝膠電泳28

2.5免疫電泳29

2.6等電聚焦電泳30

2.7毛細管電泳31

2.8電泳結果處理34

3色譜技術36

3.1色譜技術概述36

3.2凝膠色譜42

3.3離子交換色譜50

3.4親和色譜56

3.5具體的一些色譜方法62

3.6高效液相色譜66

4PCR技術70

4.1PCR基本原理70

4.2PCR的基本過程70

4.3PCR實驗技術要點71

4.4提高PCR擴增特異性73

5膜分離技術74

5.1透析74

5.2超濾75

6免疫技術——酶聯免疫吸附測定法(ELISA)76

6.1原理76

6.2操作要點76

7生物大分子製備技術81

7.1概述81

7.2生物大分子製備的前處理82

7.3生物大分子的分離純化84

7.4樣品的保存85

第三篇實驗部分87

第一部分糖類實驗87

實驗一還原糖和總糖的測定(3,5二硝基水楊酸法)87

實驗二可溶性總糖的蒽酮比色法測定88

實驗三費林試劑法測定總糖89

實驗四磷鉬酸比色法測定血糖91

實驗五黏多糖——肝素鈉效價的測定93

實驗六澱粉的提取及性質實驗94

實驗七澱粉與纖維素的測定95

實驗八肝糖原的提取及鑑定97

實驗九果膠的提取與膠凍的製備98

實驗十可溶性糖的硅膠G薄層色譜99

實驗十一糖的聚酰胺薄層色譜101

實驗十二細菌細胞壁糖的薄層色譜102

實驗十三葡萄糖1磷酸的製備及其純度的測定104

第二部分脂類實驗107

實驗十四脂肪的鹼水解及組分鑑定107

實驗十五粗脂肪的定量測定——索氏抽提法108

實驗十六皂化值的測定109

實驗十七酸值的測定110

實驗十八碘值的測定111

實驗十九卵磷脂的提取及鑑定113

實驗二十磷硫鐵法測定血清膽固醇114

實驗二十一分光光度法測定膽紅素(改良JG法)115

實驗二十二紅細胞膜的製備及其成分分析(磷脂、膽固醇)116

第三部分氨基酸和蛋白質類實驗120

實驗二十三氨基酸的紙色譜120

實驗二十四薄層色譜法分離氨基酸122

實驗二十五甲醛滴定法測定氨基酸123

實驗二十六華勃氏呼吸計法測定L穀氨酸124

實驗二十七旋光法測定穀氨酸127

實驗二十八蛋白質的沉澱反應、顏色反應、兩性反應、電荷及等電點的測定128

實驗二十九粗蛋白的定量測定——微量凱氏定氮法132

實驗三十紫外光吸收法測定蛋白質含量135

實驗三十一雙縮脲法測定蛋白質含量137

實驗三十二考馬斯亮藍G250法(Bradford法)測定蛋白質含量138

實驗三十三Folin酚試劑法(Lowry法)測定蛋白質139

實驗三十四尿素對蛋白質的變性作用141

實驗三十五蛋白質DNS分析法(DNS—Cl膜色譜技術)142

實驗三十六乙酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白質144

實驗三十七垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質146

實驗三十八等電聚焦電泳測定蛋白質等電點147

實驗三十九SDSPAGE電泳測定蛋白質相對分子質量149

實驗四十凝膠色譜法測定蛋白質相對分子質量151

實驗四十一酪蛋白的提取152

實驗四十二植物葉蛋白的提取153

實驗四十三細胞色素C的製備及其測定155

第四部分核酸類實驗158

實驗四十四質粒DNA的鹼裂解法提取與純化158

實驗四十五植物組織中核酸的提取和測定160

實驗四十六酵母RNA的分離與組分鑑定162

實驗四十七DNA的瓊脂糖凝膠電泳163

實驗四十八RNA的聚丙烯酰胺凝膠電泳165

實驗四十九DNA重組167

實驗五十PCR聚合酶擴增DNA168

實驗五十一逆轉錄聚合酶(PCR)鏈反應169

第五部分酶類實驗170

實驗五十二過氧化氫酶和過氧化物酶的作用170

實驗五十三温度、pH、激活劑和抑制劑對唾液澱粉酶活性的影響172

實驗五十四大麥萌發前後澱粉酶活力的比較174

實驗五十五枯草桿菌蛋白酶活力的測定175

實驗五十六轉氨酶GPT、GOT活性的測定177

實驗五十七脲酶的動力學研究178

實驗五十八糖化型澱粉酶活力的測定183

實驗五十九蛋清溶菌酶的製備及活力測定184

實驗六十正交法測定對酶活力影響的幾種因素185

實驗六十一鹼性磷酸酶的分離與純化188

實驗六十二結晶乳酸脱氫酶(LDH)的製備190

實驗六十三琥珀酸脱氫酶的活性測定及丙二酸的抑制作用191

實驗六十四辣根過氧化物酶的製備及酶比活力的測定192

實驗六十五發色底物測定大麴中α葡萄糖苷酶活力195

實驗六十六酵母蔗糖酶的純化及性質研究197

實驗六十七固定化酵母細胞及蔗糖酶的檢測201

實驗六十八親和色譜法純化胰蛋白酶202

第六部分維生素類實驗205

實驗六十九維生素A的測定(三氯化銻比色法)205

實驗七十還原型維生素C的測定206

實驗七十一總維生素C的測定——2,4二硝基苯肼比色法207

實驗七十二熒光法測定維生素B2(核黃素)209

實驗七十三高效液相色譜法測定脂溶性維生素210

第七部分代謝類實驗212

實驗七十四肌糖原的酵解作用212

實驗七十五發酵過程中無機磷的利用214

實驗七十六糖酵解中間產物的鑑定215

實驗七十七氨基轉移反應的定性鑑定216

實驗七十八脂肪酸的β氧化218

第八部分其他實驗220

實驗七十九辛酸硫酸銨法從人血清中純化免疫球蛋白(IgG)220

實驗八十免疫電泳技術221

實驗八十一ELISA法測定單克隆抗體的效價222

實驗八十二分光光度法測定葉綠素含量224

附錄226

附錄1一些常用化合物的溶解度(20℃)226

附錄2酸、鹼溶液的配製226

附錄3常用酸鹼體積分數、相對密度和物質的量濃度的關係226

附錄4某些有機溶劑的主要物理常數228

附錄5一些常用酸鹼指示劑228

附錄6混合指示劑229

附錄7氧化還原染料229

附錄8染料和熒光標準試劑229

附錄9生物髮色團230

附錄10某些重要生化物質的摩爾消光係數230

附錄11氨基酸的一些物理常數231

附錄12元素的相對原子質量表232

附錄13調整硫酸銨溶液飽和度計算表(25℃)233

附錄14調整硫酸銨溶液飽和度計算表(0℃)233

附錄15氣體乾燥劑234

附錄16液體乾燥劑234

附錄17易變質及需要特殊方法保存的試劑234

附錄18冷卻劑234

附錄19常用緩衝溶液的配製235

參考書目240

^[1] 

生物化學是生物工程與技術、食品、醫藥和農業等專業的基礎課，不僅具有較強的理論性，而且具有一定的實踐性。只有紮實地掌握系統的生物化學基礎知識、熟練的實驗操作技能，才能在相應的專業技術領域真正地有所造詣和建樹。目 前已出版的生物化學實驗教材種類繁多，但大多都是針對各自專業範圍而進行編排的，實驗內容不夠全面、豐富。正是基於以上考慮，我們才有了出版本書的意願。 ^[1]