蛋白酶k

從林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中純化得到。據資料顯示：該酶有兩個Ca2+結合位點，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機理並無直接關係。然而，如果從該酶中除去Ca2+，由於出現遠程的結構變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩餘活性通常已足以降解在一般情況下污染酸製品的蛋白質。所以，蛋白酶k消化過程中通常加入EDTA（以抑制依賴於Mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化對蛋白酶k具有較強耐性的蛋白，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的緩衝液。在消化完畢後、純化核酸前要加入EGTA（ph8.0）至終濃度為2mmol/l,以鰲合Ca2+。

蛋白酶K，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由於蛋白酶K在尿素和SDS中穩定，還具有降解天然蛋白質的能力，因而它應用很廣泛，包括製備脈衝電泳的染色體DNA，蛋白質印跡以及去除DNA和RNA製備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH範圍內（pH 4-12.5）均有活性。

推薦反應緩衝液：50mMTris-HCl(pH7.5),10mM CaCl2 。

蛋白酶K配製標準：20mg/ml蛋白酶K配製標準（proteinase K）：將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然後分裝成小份貯存於-20℃。

蛋白酶K是一種絲氨酸蛋白酶，因此可以用苯甲基磺酰氟抑制其作用，苯甲基磺酰氟是一種絲氨酸蛋白酶的抑制劑。

值得注意的是，蛋白酶K在原位雜交技術中通常用於雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育温度過高時,都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脱落,細胞核的消失,從而影響雜交結果.EDTA緩衝液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現的問題,並能達到理想的染色效果.

保存：保存在－20℃冰箱裏，避免反覆凍融，有效保證12月。

孵育温度為55至65℃，理想孵育温度為58℃，孵育時間為15分鐘至48小時；理想孵育時間為2小時。

蛋白酶K已廣泛應用在皮革、毛皮、絲綢、醫藥、食品、釀造等方面。皮革工業的脱毛和軟化已大量利用蛋白酶，既節省時間，又改善勞動衞生條件。蛋白酶還可用於蠶絲脱膠、肉類嫩化、酒類澄清。臨牀上可作藥用，如用胃蛋白酶治療消化不良，用酸性蛋白酶治療支氣管炎，用彈性蛋白酶治療脈管炎以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶對外科化膿性創口的淨化及胸腔間漿膜粘連的治療。加酶洗衣粉是洗滌劑中的新產品，含鹼性蛋白酶，能去除衣物上的血漬和蛋白污物，但使用時注意不要接觸皮膚，以免損傷皮膚表面的蛋白質，引起皮疹、濕疹等過敏現象。