醋酸纖維素薄膜電泳

它溶於丙酮等有機溶液中，即可塗布成均一細密的微孔薄膜，厚度以0.1mm—0.15mm為宜。太厚吸水性差，分離效果不好；太薄則膜片缺少應有的機械強度則易碎。

醋酸纖維薄膜電泳操作簡單、快速、廉價。已經廣泛用於血清蛋白，血紅蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋 白，甲胎蛋白，類固醇激素及同工酶等的分離分析中，儘管它的分辨力比聚丙酰胺凝膠電泳低，但它具有簡單，快速等優點。

1.（1）醋酸纖維薄膜對蛋白質樣品吸附極少，無“拖尾”現象，染色後背景能完全脱色，各種蛋白質染色帶分離清晰，因而提高了測定的精確性。

（2）快速省時。由於醋酸纖維薄膜親水性較濾紙小，薄膜中所容納的緩衝液也較少，電滲作用小，電泳時大部分電流是由樣品傳導的，所以分離速度快，電泳時間短，一般電泳45—60min即可，加上染色，脱色，整個電泳完成僅需90min左右。

（3）靈敏度高，樣品用量少。 血清蛋白僅需2μl血清，甚至加樣體積少至0.1μl，僅含5μg蛋白樣品也可得到清晰的分離帶。臨牀醫學檢驗利用這一點，檢測在病理情況下微量異常蛋白的改變。

（4）應用面廣。某些蛋白在紙上電泳不易分離，如胎兒甲種球蛋白，溶菌酶，胰島素，組蛋白等用醋酸纖維薄膜電泳能較好地分離。

（5）醋酸纖維薄膜電泳染色後，經冰乙酸，乙醇混合液或其它溶液浸泡後可製成透明的幹板，有利於掃描定量及長期保存。

2、醋酸纖維薄膜電泳與聚丙烯酰胺凝膠電泳相比，操作簡單，但分離效果不太好。如血清蛋白在醋酸纖維素薄膜電泳中，只能分離出5—6條區帶，而聚丙烯酰胺凝膠電泳可分離出數10條區帶。

根據樣品理化性質，從提高電泳速度和分辨力出發選擇緩衝液的種類，pH和離子強度。選擇好的緩衝液最好是揮發性強，對顯色或紫外光等觀察區帶沒有影響，若樣品含鹽量較高時，宜採用含鹽緩衝液。例如血清蛋白電泳可選用pH8.6的巴比妥緩衝液或硼酸緩衝液；氨基酸的分離則可選用pH7.2的磷酸鹽緩衝液等。電泳時先將濾膜剪成一定長度和寬度的紙條。在欲點樣的位置用鉛筆做上記號，點上樣品，在一定的電壓，電流下電泳一定時間，取下濾膜，進行染色。不同物質需採用不同的顯色方法，如核苷酸等物質可在紫外分析燈下觀察定位，但許多物質必須經染色劑顯色。

醋酸纖維薄膜電泳染色後區帶可剪下，溶於一定的溶劑中進行光密度測定。也可以浸於折射率為1.474的油中或其他透明液中使之透明，然後直接用光密度計測定。

它的缺點是厚度小，樣品用量很小，不適於製備。

1、醋酸纖維薄膜的預處理

市售醋酸纖維薄膜均為幹膜片，薄膜的浸潤與選膜是電泳成敗的重要關鍵之一。將幹膜片漂浮於電極緩衝液表面，其目的是選擇膜片厚薄及均勻度，如漂浮15s—30s時，膜片吸水不均勻，則有白斑點或條紋，這提示膜片厚薄不勻，應捨去不用，以免造成電泳後區帶扭曲，界線不清，背景脱色困難，結果難以重複。由於醋酸纖維薄膜親水性比紙小，浸泡30min以上是保證膜片上有一定量的緩衝液，並使其恢復到原來多孔的網狀結構。最好是讓漂浮於緩衝液的薄膜吸滿緩衝液後自然下沉，這樣可將膜片上聚集的小氣泡趕着走。點樣時，應將膜片表面多餘的緩衝液用濾紙吸去，以免緩衝液太多引起樣品擴散。但也不能吸得太乾，太乾則樣品不易進入薄膜的網孔內，而造成電泳起始點參差不齊，影響分離效果。吸水量以不幹不濕為宜。為防止指紋感染，取膜時，應戴指套或用鑷子。

2、緩衝液的選擇

醋酸纖維薄膜電泳常選用pH8.6巴比妥溶液，其濃度為0.05mol/L—0.09mol/L。選擇何種濃度與樣品及薄膜的薄厚有關。選擇時，先初步定下某一濃度，如電泳槽兩極之間的膜長度為8 cm—10cm，則需電壓25V/cm膜長，電流強度為0.4mA/cm—0.5mA/cm膜寬。當電泳達不到或超過這個值時，則應增加緩衝液濃度或進行稀釋。緩衝液濃度過低，則區帶泳動速度快，並由於擴散變寬；緩衝液濃度過高，則區帶泳動速度慢，區帶分佈過於集中不易分辨。

3、加樣量

加樣品的多少與電泳條件、樣品的性質、染色方法與檢測手段靈敏度密切相關。作為一般原則，檢測方法越靈敏，加樣量則越少，對分離更有利。如加樣量過大，則電泳後區帶分離不清楚，甚至互相干擾，染色也較費時。如電泳後用洗脱法定量時，每釐米加樣線上需加樣品0.1μl—0.5μl約相當於5μg—1000μg蛋白。血清蛋白常規電泳分離時，每釐米加樣線加樣量不超過1μl，相當於60μg—80μg的蛋白質。但糖蛋白和脂蛋白電泳時，加樣量則應多些。對每種樣品加樣量均應先作預實驗加以選擇。

點樣好壞是獲得理想圖譜的重要環節之一，以印章法加樣時，動作應輕、穩，用力不能太重，以免將薄膜弄壞或印出凹陷而影響電泳區帶分離效果。

4、電量的選擇

電泳過程應選擇合適的電流強度，一般電流強度為0.4mA/cm—0.5mA/cm寬膜為宜。電流強度高，尤其在温度較高的環境中，可引起蛋白質變性或由於熱效應引起緩衝液中水分蒸發，使緩衝液濃度增加，造成膜片乾涸。電流過低，則樣品泳動速度慢且易擴散。

5、染色液的選擇

對醋酸纖維薄膜電泳後染色應根據樣品的特點加以選擇。其原則是染料對被分離樣品有較強的着色力，背景易脱色；應儘量採用水溶性染料，不宜選擇醇溶性染料，以免引起醋酸纖維素膜溶解。

應控制染色時間。時間長，薄膜底色深不易脱去；時間短，着色淺不宜區分，或造成條帶染色不均，必要時可進行復染。

6、透明及保存

透明液應臨用前配製，以免冰乙酸及乙醇揮發影響透明效果。這些試劑最好選用分析純。透明前，薄膜應完全乾燥。透明時間應掌握好，如在透明乙液中浸泡時間太長則薄膜溶解，太短則透明度不佳。

透明後的薄膜完全乾燥後才浸入石蠟中，使薄膜軟化。如有水，則液體石蠟不易浸入，薄膜不易平展。