反饋

氨基酸等電點

鎖定

在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電中性，此時的溶液pH稱該氨基酸的等電點。

中文名: 氨基酸等電點
外文名: Isoelectric point of amino acids
p h: 稱該氨基酸的等電點。

定義: 氨基酸淨電荷為零時的pH值
計算公式: pI=1/2（pKa1+PKa2）酸性氨基酸 pI=1/2（pKa2+PKa3）鹼性氨基酸

氨基酸等電點基本信息

isoeletric point ，pI 定義：

2、氨基酸淨電荷為零時的pH值。

3、氨基酸是兩性電解質，在鹼性溶液中表現出帶負電荷，在酸性溶液中表現出帶正電荷，在某一定pH溶液中，氨基酸所帶的正電荷和負電荷相等時的pH,稱為該氨基酸的等電點。

氨基酸等電點pI計算

1、對於側鏈 R基不解離的中性氨基酸來説，pI=1/2（pK_a1+PK_a2）。

2、對於有多個解離基團的氨基酸來説，只要寫出它的解離公式，然後取等電兼性離子兩邊的pK_a的平均值則得出其pI值。

注：pI值與該離子濃度基本無關，只取決於等電中性離子A⁰兩側的pK值。

氨基酸等電點濃度測定

1、氨基酸的甲醛滴定（formal titration）

氨基酸等電點原理

氨基酸雖然是一種兩性電解質，即是酸性又是鹼性，但它卻不能直接用酸鹼滴定來進行測量。這是因為氨基酸的酸鹼滴定的等電點pH過高（12-13）或是過低（1-2）沒有適合的指示劑可備選用。而向氨基酸中加入過量的甲醛，用氫氧化鈉滴定時，由於甲醛可與氨基酸上的—N⁺H₃結合，形成—NH—CH₂OH、—N(CH₂—OH)₂等羥甲基衍生物，而降低了氨基酸的鹼性，相對增強了—N⁺H₃的解離，使滴定終點移到了pH9附近，在酚酞指示劑的變色區域內，能夠用酚酞作為指示劑進行滴定。

以上出自《生物化學》（高等教育出版社 2006.5，王鏡巖等主編）

氨基酸等電點流程

甲醛滴定法測定氨基酸含量

目的

初步掌握甲醛滴定法測定氨基酸含量的原理和操作要點

原理

水溶液中的氨基酸為兼性離子，因而不能直接用鹼滴定氨基酸的羧基。甲醛可與氨基酸上的—N⁺H₃結合，形成—NH—CH₂OH、—N(CH₂—OH)₂ 等羥甲基衍生物，使N⁺H₃上的H⁺遊離出來，這樣就可以用鹼滴定N⁺H₃放出H⁺，測出氨基氮，從而計算氨基酸的含量。

若樣品中只含有單一的已知氨基酸，則可由此法滴定的結果算出氨基酸的含量。若樣品中含有多種氨基酸（如蛋白質水解液），測不能由此法算出氨基酸的含量。

脯氨酸與甲醛作用後，生成的化合物不穩定，導致滴定後結果偏低；酪氨酸含酚基結構，導致滴定結果偏高。

材料、試劑與器具

（一）試劑

1、0.5%酚酞酒精溶液

稱0.5g酚酞溶於100ml60%酒精中。

2、0.05%溴麝香草酚藍溶液

取0.05溴麝行草酚藍溶於100ml 20%乙醇溶液中。

3、1%甘氨酸溶液

取1g甘氨酸溶於100ml蒸餾水。

4、標準0.100mol/L 氫氧化鈉溶液

5、中性甲本醛溶液

取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示劑約3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液，使溶液呈微粉紅色，臨用前中和。

（二）實驗器具

1、錐形瓶 2、鹼式滴定管

3、移液管洗耳球 4、天平

5、容量瓶 6、試劑瓶

7、量筒 8、玻棒與燒杯

氨基酸等電點操作步驟

1、取3只100ml錐形瓶，按下表加入試劑

錐形瓶編號試劑	樣品1	樣品2	空白
1%甘氨酸溶液或樣品（ml）	2.0	2.0	—
蒸餾水（ml）	5.0	5.0	7.0
中性甲醛溶液（ml）	5.0	5.0	5.0
0.05%溴麝香草酚藍溶液（滴）	2	2	2
0.5%酚酞乙醇溶液（滴）	4	4	4