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HE染色
鎖定
- 中文名
- 蘇木精 — 伊紅染色法
- 外文名
- hematoxylin-eosin staining
- 簡 稱
- HE染色法
- 應用領域
- 生物醫學
HE染色適用範圍
HE染色原理
構成組織內蛋白質的氨基酸的種類很多,它們有不同的等電點。在普通染色法中,染色液的酸鹼度為pH6左右,細胞內的酸性物質如細胞核的染色質、腺細胞和神經細胞內的粗麪內質網及透明軟骨基質等均被鹼性染料染色,這些物質稱為嗜鹼性。而細胞質中的其它蛋白質如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,這些物質稱為嗜酸型。如果改變染色液的酸鹼度,pH值升高時,則原來被酸性染料染色的物質可變為嗜鹼性;pH值降低時,原來被鹼性染料染色的物質則可變為嗜酸性。所以説染色液的pH值可以影響染色的反應。
脱氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外,帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵結合而被染色。蘇木精在鹼性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質的氨基正電荷的陽離子結合使胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明對比。伊紅是細胞漿的良好染料。
由於組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質不一樣。經蘇木精染色後,細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色,可用鹽酸酒精分化和弱鹼性溶液顯藍,如處理適宜,可使細胞核着清楚的深藍色,胞漿等其它成分脱色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細胞成分與病變的一般形態結構特點均可顯示出來。
HE染色試劑與儀器
A:0.5~1% 的伊紅酒精溶液:
B:蘇木素染液配方:(配製3000 ml,可按比列減少)
蘇木精6 g
無水乙醇100 ml
硫酸鋁鉀150 g
蒸餾水2000 ml
碘酸鈉1.2 g
冰醋酸 120 ml
甘油 900 ml
HE染色操作步驟
常規he染色步驟
(1)二甲苯(Ⅰ) 15min
(2) 二甲苯(Ⅱ) 15 min
(3)二甲苯:無水乙醇=1:1 2min
(4) 100%乙醇(Ⅰ) 5min
(5) 100%乙醇(Ⅱ) 5 min
(6) 80%乙醇 5min
(7) 蒸餾水 5 min
(8) 蘇木精液染色 5 min
(9) 水洗10 min 或流水沖洗5 min
(10) 1%鹽酸乙醇 30s
(11) 水洗 30 s
(12)蒸餾水過洗 5 s
(13) 0.5%伊紅液染色 1-3 min
(14) 蒸餾水稍洗 30 s
(15) 80%乙醇稍洗 30 s
(16) 95%乙醇(Ⅰ)1 min
(17) 95%乙醇(Ⅱ) 1 min
(18) 無水乙醇 (Ⅰ)3 min
(19)無水乙醇(Ⅱ)3 min
(20)二甲苯(Ⅰ) 3 min
(21)二甲苯(Ⅱ) 3 min
(22)中性樹膠封固
冷凍切片HE染色步驟
(1)冰凍切片固定 10~30 s
(2)稍水洗 1~2 s
(3)蘇木精液染色(60℃) 30~60 s
(4)流水洗去蘇木精液 5~10 s
(5)1%鹽酸乙醇 1~3 s
(6)稍水洗 1~2 s
(7)促藍液返藍 5~10 s
(8)流水沖洗 15~30 s
(9)0.5%曙紅液染色 30~60 s
(10)蒸餾水稍洗 1~2 s
(11)80%乙醇 1~2 s
(12)95%乙醇 1~2 s
(13)無水乙醇 1~2 s
(14)石炭酸二甲苯 2~3 s
(15)二甲苯(Ⅰ) 2~3 s
(16)二甲苯(Ⅱ) 2~3 s
(17)中性樹膠封固。
注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用無水乙醇。
注意事項
切片脱水透明 切片經HE染色後,要徹底脱水透明,才能用中性樹膠封蓋。如果脱水不徹底,封片後呈白色霧狀,鏡下觀察模糊不清,且容易褪色。切片1-2級無水乙醇脱水,也可使用石炭酸二甲苯進行脱水。石炭酸有較強脱水能力,但長時間可使切片脱色,因此要經過多次二甲苯以使石碳酸完全除去。
HE染色結果的判斷
實驗結果
細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍色,粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。
着色情況與組織或細胞的種類有關,也隨其生活週期及病理變化而改變。例如,細胞在新生時期胞漿對伊紅着色較淡或輕度嗜鹼,當其衰老時或發生退行性變則呈現嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現透明變性時,伊紅着色由淺變深。
H-E染色評定標準:
(1)切片完整,厚度4-6微米,厚薄均勻,無皺褶無刀痕;
(2)染色核漿分明,紅藍適度,透明潔淨,封裱美觀。
- 參考資料
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- 1. 病理診斷中的HE染色方法,你瞭解多少 .大象網[引用日期2023-12-22]