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DNA變性
鎖定
DNA變性簡介
DNA變性性質改變
變性DNA常發生一些理化及生物學性質的改變:
3)增色效應(hyperchromic effect)。指變性後DNA溶液的紫外吸收作用增強的效應。DNA分子中鹼基間電子的相互作用使DNA分子具有吸收260nm波長紫外光的特性。在DNA雙螺旋結構中鹼基藏入內側,變性時DNA雙螺旋解開,於是鹼基外露,鹼基中電子的相互作用更有利於紫外吸收,故而產生增色效應。
4)浮力密度升高。
5)生物活性改變。
DNA變性產生原因
DNA變性應用
DNA變性,也可用於檢測兩個不同的DNA序列之間之序列差異。將DNA加熱和變性成單鏈狀態,並將該混合物冷卻使可以重新進行雜交。雜交分子的相似序列中如果互補序列有差異,則會導致鹼基配對中斷。在基因組範圍中,該方法已被用於估算兩物種之間遺傳距離的研究,稱為DNA-DNA雜交。在其中的單個分區的DNA,變性梯度凝膠和温度梯度凝膠可用於檢測此兩個序列,此法稱為温度梯度凝膠電泳,為表現較小差異時使用的方法。
DNA熔解的也應用於分子生物學技術,特別是在聚合酶鏈式反應。儘管此技術不能診斷DNA熔化的温度,所以估計(Tm)是確定來調整是和温度是非常重要的。DNA的熔解温度也可被用作用於均衡的一組分子的雜交優勢,例如的寡核苷酸探針DNA微陣列。
DNA變性熔解温度
(Tm,melting temperature)
對雙鏈DNA進行加熱變性,當温度升高到一定高度時,DNA溶液在260nm處的吸光度突然明顯上升至最高值,隨後即使温度繼續升高,吸光度也不再明顯變化。若以温度對DNA溶液的紫外吸光率作圖,得到的典型DNA變性曲線呈S型。可見DNA變性是在一個很窄的温度範圍內發生的。通常將核酸加熱變性過程中,紫外光吸收值達到最大值的50%時的温度稱為核酸的解鏈温度,由於這一現象和結晶的融解相類似,又稱融解温度(Tm,melting temperature)。在Tm時,核酸分子內50%的雙螺旋結構被破壞。特定核酸分子的Tm值與其G+C所佔總鹼基數的百分比成正相關,兩者的關係可表示為:? Tm=69.3+0.41*(G+C)%?一定條件下(相對較短的核酸分子),Tm值大小還與核酸分子的長度有關,核酸分子越長,Tm值越大;另外,溶液的離子強度較低時,Tm值較低,融點範圍也較寬,反之亦然,因此DNA製劑不應保存在離子強度過低的溶液中。