馬鈴薯培養基

按培養基配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中，加水至1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持20-30min，用可用2層紗布趁熱在量杯上過濾，濾渣棄取。濾液補充水分到1000ml。 ^[1] 

把濾液放入鍋中，加入葡萄糖20g，瓊脂15～20g(提前搗碎)，然後放在石棉網上，小火加熱，並用玻璃棒不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，待瓊脂完全溶解後，再補充水分至所需量。

按實訓要求，將配製的培養基分裝入試管或500ml錐形瓶內。分裝時可用三角漏斗以免使培養基沾在管口或瓶口上造成污染。

分裝量：固體培養基約為試管高度的1/5，滅菌後製成斜面，分裝入三角瓶內以不超過其容積的一半為宜;半固體培養基以試管高度的1/3為宜，滅菌後垂直待凝。

培養基分裝完畢後，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或試管帽等)，以阻止外界微生物進入培養基內造成污染，並保證有良好的通氣性能。

加塞後，將全部試管用麻繩或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道線繩或橡皮筋紮好，用記號筆註明培養基名稱、組別、配製日期。

確認工作細胞庫是否被污染，確認毒種工作種子批是否被污染，確認所用培養基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染，均可用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認並排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中，可以從配製好的培養液中取少量加入營養瓊脂於恆温培養箱內培養，48小時即可觀察有無污染。

高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證，確保滅菌和除菌效果;前者應在投產前及其後的每6個月進行驗證，後者應在每次除菌前、後進行驗證工作(至少應在除菌後進行一次)。

另外，應將有毒區與無毒區嚴格分開，並有各自獨立的空氣淨化系統及孵室，有毒區對無毒區應保持相對負壓，防止病毒對培養細胞(尤其是細胞庫)的污染。

馬鈴薯20g、蔗糖 2g、自來水 100mL、瓊脂 2g、pH 自然(約6.0)

滅菌：1.05kg/cm2，20min

馬鈴薯去皮，切成塊加水，煮沸30min(注意火力的控制，可適當補水) ，用紗布過濾，濾液加糖，補足水至100ml，裝入三角瓶。 ^[2] 

綜合馬鈴薯培養基 20%馬鈴薯煮汁 1000 毫升 磷酸二氫鉀 3克 硫酸鎂 1.5克 葡萄糖 20克 維生素 10毫克 瓊脂 18克 先配製20%馬鈴薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各種組分，加熱溶解後補足水分，調整pH值到6。分裝，滅菌，備用。 該培養基用於培養和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。馬鈴薯糖瓊脂培養基 把馬鈴薯洗淨去皮，取200克切成小塊，加水1000毫升，煮沸半小時後，補足水分。在濾液中加入10克瓊脂，煮沸溶解後加糖20克(用於培養黴菌的加入蔗糖，用於培養酵母菌的加入葡萄糖)，補足水分，分裝，滅菌，備用。 把這培養基的pH值調到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖還可用來培養放線菌和芽孢桿菌。 按所用原料不同，可分為兩類：應用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配製的，稱為天然培養基;應用化學藥品配成並標明成分的，稱為合成培養基或綜合培養基。馬鈴薯培養基就是天然培養基，綜合馬鈴薯培養基就是人工合成的。

不同的生物需要不同培養基，注意配方的選取，稱取要準確，誤差不能太大對於特殊物品，不能滅菌的要用過濾方法除菌。配好後高温高壓滅菌，可以在室温下放置很久，如果打開使用過一次，請放置冰箱。如果長時間不用，一定要重新配置，不能拿以前的用來培養，避免污染。

培養基的製備程序不同類型培養基製備的程序也不盡相同。但一般培養基的程序主要可分為：配料、溶化、矯正pH、澄清過濾、分裝、滅菌及檢定等8個步驟。

(一)配料

按培養基處方準確稱取各種成分，先在三角燒瓶中加入少量蒸餾水，再加入各種成分，以防蛋白腖等粘附於瓶底，然後再以剩餘的水沖洗瓶壁。

(二)溶化

將各種成分混勻於水中，最好以流通蒸氣溶化半小時，如在電爐上溶化應隨時攪拌，如有瓊脂成分時更應注意防止外溢。溶化完畢，補足失去的水分。

(三)矯正pH

1.pH測定

取與標準管同口徑的試管(通常用華氏試管)3支，於第1、3管各加入欲測定pH的的培養基5ml，並於第一管中加入0.2g/L的酚紅0.25ml作為測定管，混勻;於第2管加入蒸餾水5ml，第4管為pH標準比色管。

2.pH的校正

若測定管過酸或過鹼可用0.1mol/L氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸溶液矯正，直至顏色與標準管相同為止，加鹼或加酸時要精確緩慢，每加1滴後要充分混勻，比色後再加第2滴(有時僅加半滴)準確記錄加入的量。

3.計算

設5ml培養基矯正pH至7.4時需0.1mol/L氫氧化鈉0.15ml，現有培養基4990ml，需加氫氧化鈉的量可按下列方法計算：5∶4990=0.15∶X

X=0.15×4990/5=149.7(ml)

如將此0.1mol/L的氫氧化鈉改用1mol/L的氫氧化鈉時，則需14.9ml即可。

(四)過濾澄清

培養基配製後一般都有沉渣或混濁出現，需過濾成清晰透明後方可使用，常用的過濾方法如下：

1.液體培養基

液體培養基必須清晰，以便觀察細菌的生長情況，常用濾紙過濾，亦可在加熱前加入用水稀釋的雞蛋白(1000ml培養基用1個雞蛋白)在100℃加熱後保持60～70℃40～60分鐘，使其不溶性物質附於凝固的蛋白上而沉澱，然後再用虹吸法吸出上清液或以濾紙過濾。

2.固體培養基

如系瓊脂培養基，於加熱融化後需趁熱以絨布或兩層紗布中夾脱脂棉過濾;亦可用

自然沉澱法，即將瓊脂培養基盛人鋁鍋或廣口搪瓷容器內，以高壓(103.43kPa)蒸汽融化15分鐘後，靜置高壓鍋內過夜，次日將瓊脂傾出，用刀將底部沉渣切去，再融化即可收清晰的瓊脂培養基。

(五)分裝

1.根據需要將培養基分裝於不同容量的三角燒瓶、試管中。分裝的量不宜超過容器的2/3以免滅菌時外溢。

2.瓊脂斜面分裝量為試管容量的1/5，滅菌後須趁熱放置成斜面，斜面長約為試管長的2/3.

3.半固體培養基分裝量約為試管長的1/3，滅菌後直立凝固待用。

4.高層瓊脂分裝量約為試管的1/3，滅菌後趁熱直立，待冷後凝固待用。

5.液體培養基分裝於試管中，約是試管長度的1/3.

6.瓊脂平板：將滅菌(或加熱融化)後的培養基冷至50℃左右，以無菌手續傾人滅菌平皿內，內徑225px的平皿傾注培養基約13～15ml，輕搖平皿底，使培養基平鋪於平皿底部，待凝固後即成，傾注培養基時，切勿將皿蓋全部啓開，以免空氣中塵埃及細菌落入。

新制成的平板培養基(簡稱平板)，表面水分較多，不利於細菌的分離，通常應將平皿倒扣擱置於37℃培養箱內約30分鐘待平板平面乾燥後使用。