細胞庫

三級細胞庫管理包括，初級細胞庫（細胞種子）、主細胞庫（MCB，Main Cell Bank）和工作細胞庫（WCB，Working Cell Bank）。在某些特殊情況下，也可採用細胞種子和主細胞庫二級管理，但需要得到國務院藥品監督部門的批准。

（1）初級細胞庫(pre-master cell bank)，又名細胞種子(cell seed)和原始細胞庫 (Primary Cell Bank，PCB), 由一個原始細胞羣體發展成為傳代穩定的細胞羣體，或經過克隆培養形成的均一細胞羣體，通過檢定證明適用於生物製品生產或檢定。在特殊條件下，將一定數量、成分均一的細胞懸液，定量均勻分裝於安瓿或適宜的細胞凍存管，於液氮或-130℃以下凍存，即為原始細胞庫，供建立主細胞庫用。

對於引進細胞，生產者獲得細胞後，凍存少量細胞，通過驗證可用於生物製品生產，此細胞可作為細胞種子，供建立主細胞庫用。

（2）主細胞庫(Master Cell Bank，MCB)，原始細胞庫細胞傳代增殖後均勻混合成一批，定量分裝，保存於液氮或-130℃以下。這些細胞須按其特定的質控要求進行全面檢定((具體檢定項目要求見表1和表2))，全部合格後即為主細胞庫，供建立工作細胞庫用。主細胞庫的質量標準應高於初級細胞庫。生產企業的主細胞庫最多不得超過兩個細胞代次。

（3）工作細胞庫(Working Cell Bank，WCB)，經主細胞庫細胞傳代增殖，達到一定代次水平的細胞，合併後製成一批均質細胞懸液，定量分裝於一定數量的安瓿或適宜的細胞凍存管，保存於液氮或一130°C以下備用，即為工作細胞庫。凍存時細胞的傳代水平須確保細胞復甦後傳代增殖的細胞數量能滿足生產一批或一個亞批製品。復甦後的傳代的水平應不超過批准的該細胞用於生產的最高限定代次，最高限定代次應根據研究結果確定，不得超過國際認可的最高限定代次。工作細胞庫的質量標準應在主細胞庫的質量標準基礎上建立。所製備的WCB必須經檢定合格後，方可用於生產。生產企業的工作細胞庫必須限定為一個細胞代次。

主細胞庫和工作細胞庫應分別存放。每一個庫應在生產設施內至少2個不同的地點或區域存放。應檢測並維護細胞庫凍存容器，以保證細胞庫貯存在一個高度穩定的環境中。

非生產用的細胞和生產用細胞嚴格分開存放。

每種細胞庫均應分別建立台賬，詳細記錄放置位置、容器編號、分裝及凍存數量，取用記錄等。細胞庫中的每支細胞均應具有細胞系/株名、代次、批號、編號、凍存日期，貯存容器的編號等信息。

為保證細胞凍存後仍具有良好的活力，凍存前的細胞活力應不低於90% ，凍存後應取一定量的可代表凍存全過程的凍存管復甦細胞，復甦後細胞的活力應不低於80%。二倍體細胞凍存後，應至少做一次復甦培養並連續傳代至衰老期，檢查不同傳代水平的細胞生長情況。細胞凍存後，可通過定期復甦細胞及復甦後細胞的活力數據驗證細胞在凍存及貯存條件下的穩定性。

原始細胞庫的數量是根據實際來計算的，每個品種可能都不一樣。需要考慮後續生產、檢定需要、保藏年限，檢測用數量、複檢頻率等，主細胞庫和工作細胞庫凍存多少數量，根據你自己的需要確定，只要保證後續生產、檢定需要足夠即可，即遵循“夠用原則”，多也是浪費。一般經驗來説，原始細胞庫凍存幾十支，比如20支，主細胞庫幾十支，比如50支，工作細胞庫一兩百支，比如50-200支，夠生產幾十年了。

原始細胞庫，主細胞庫和工作細胞庫應在B級背景下的A級潔淨等級下分離或製備後獲得，建庫過程中操作人員不得在同一區域同時處理不同活性或具有傳染性的物料，如病毒、細胞系、細胞株。

建立每個細胞庫均應有相應的建庫記錄，記錄細胞來源，何時復甦，傳代具體信息，何時凍存，凍存細胞批號，凍存的細胞代次，凍存數量。每個庫的細胞凍存後，應抽取其中可代表凍存全過程的細胞進行復蘇，檢查有無染菌，復甦後細胞活力應大於80% ^[1]  。