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氨基酸分析儀
鎖定
氨基酸分析儀,是指用於測定蛋白質、肽及其他藥物製劑的氨基酸組成或含量的方法。進行氨基酸分析前,必須將蛋白質及肽水解成單個氨基酸。它是基於陽離子交換柱分離、柱後茚三酮衍生、光度法測定的離子交換色譜儀。氨基酸分析儀由色譜柱、自動進樣器、檢測器、數據記錄和處理系統組成。氨基酸分析儀的基本原理為流動相(緩衝溶液)推動氨基酸混合物流經裝有陽離子交換樹脂的色譜柱,各氨基酸與樹脂中的交換基團進行離子交換,當用不同的pH緩衝溶液進行洗脱時因交換能力的不同而將氨基酸混合物分離,分離出的單個氨基酸組分與茚三酮試劑反應,生成紫色化合物或黃色化合物,用可見光檢測器檢測其在570 nm、440 nm的吸光度。這些有色產物對應的吸收強度與洗脱出來的各氨基酸濃度之間的關係符合朗伯-比爾定律。據此,可對氨基酸各組分進行定性、定量分析。氨基酸分析儀也可利用陰離子交換分離後經積分脈衝安培法檢測,該檢測方法無需將待測氨基酸進行柱前或柱後衍生。
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- 中文名
- 氨基酸分析儀
- 第一條
- 簡介
- 第二條
- 系統
- 第三條
- 效果
氨基酸分析儀簡介
氨基酸分析儀系統
通常細分為兩種系統:蛋白水解分析系統(鈉鹽系統)和遊離氨基酸分析系統(鋰鹽系統),利用不同濃度和pH值的檸檬酸鈉或檸檬酸鋰進行梯度洗脱。其中鈉鹽系統一次最多分析約25種氨基酸,速度較快,基線平直度好;鋰鹽系統一次最多分析約50種氨基酸,速度較慢,基線一般不如鈉鹽系統好。
氨基酸分析儀效果
分析效果:從目前已知的氨基酸分析方法比較來看,除靈敏度(最低檢測限)比HPLC柱前衍生方法稍低以外(HPLC:<0.5 pmol;氨基酸分析儀:<10 pmol),其他如分離度、重現性、操作簡便性、運行成本等方面,都優於其他分析方法。
氨基酸分析儀辨別
1、原理。基於陽離子交換柱分離、柱後茚三酮衍生、光度法測定的離子交換色譜法(IEC)。此類方法由Stein和Moore兩人1958年發明,並於1972年獲諾貝爾獎,是當今國際標準和國家標準以及仲裁和涉外的方法。
2、重要指標。滿足分析需要的技術指標如分離度、重複性等要求,而其中的分離度又是更為重要的指標,因為,色譜理論一般以分離度達到1.2作為兩峯基本分離的判定前提,只有峯分開了,才有意義去討論定性和定量的重複性。
3、指標的真實性。有些廠家只標出個別氨基酸的指標如Asp或Arg,或只用平均數據替代全部數據等等,而儀器性能好,經營信譽較高的廠家就會標出全部氨基酸的指標供用户參考。
5、儀器的運行成本。例如是否可以使用國產試劑、柱子壽命(以多少次進樣計算、而不以多少年計算)等。
6、儀器設計是否有利於氨基酸分析。例如是否有惰性氣體保護(茚三酮極易被氧化)、是否提供在線脱氣、是否提供溶液和樣品的製冷控制等。