曲頸瓶實驗

當時，社會上普遍流行着一種“自然發生説”。該學説認為，不潔的衣物會自生蚤蝨，污穢的死水會自生蚊蚋，骯髒的垃圾會自生蟲蟻，糞便和腐敗的屍體會自生蠅蛆。

意大利醫生雷地於1668年進行的實驗以及其他一些科學家的反覆驗證，曾一度動搖了人們對自然發生論的信念。可是當後來發現了微生物時，很多科學家又相信至少像微生物這樣“最小的”生物體總該是自生的。加罩容器中的腐肉不是長滿了細菌嗎。於是，微生物可能自然發生的信念又盛行起來。

巴斯德根據自己的研究實踐，不相信微生物可以自然發生，認為微生物肯定必有母體。

他到處宣傳這一理論。這下子可激怒了自生論者。他們問巴斯德：“酵母怎在地球的每一個角落裏，在每一世紀的每一年裏，不知道從什麼地方出現，把葡萄汁釀成酒？這些從天南地北，處處把每個罐裏的牛奶變酸，每瓶裏的牛油變壞的小動物，來自什麼地方？”

為了回答這些挑戰，巴斯德重做了斯帕蘭扎尼的實驗。他在圓瓶裏灌進一些酵母湯，把瓶頸焊封，煮沸幾分鐘後擱置適當時間。結果表明，瓶裏並沒有微生物生長。這一試驗並不能徹底駁倒自生論者。

他們坐在巴斯德的書房裏吵吵鬧鬧：“你在煮沸酵母湯時，把瓶裏的空氣加熱了。酵母湯產生小動物所需要的是自然的空氣。你不能證明把酵母湯和天然的未經加熱的空氣放在一起而不產生酵母、黴菌、桿菌或小動物！”

面對他人的指責，巴斯德冥思苦想，決心設計一種只讓天然空氣進入而不許其中的微生物進入的儀器。在老教授巴拉的指導下，巴斯德終於設計、製作出了符合這一要求的儀器，即著名的曲頸瓶。

巴斯德的實驗最終取得了完全的成功。他喜不自勝。在一個有學者、才子、藝術家爭相參加的巴黎盛會上，巴斯德講述了他的曲頸瓶試驗，高聲宣佈：“自然發生學説，經過這簡單實驗的致命一擊之後，絕不能再爬起來了”。

接着，巴斯德又創造性地做了一次大規模的、半公開的實驗。他和助手們將煮過的裝有細菌培養液的燒瓶分放在多塵的市區、巴黎天文台的地窖裏和其他環境中打開。

通過實驗發現，空氣越是不潔，培養液變質就越快、越嚴重。這説明使培養液變質的細菌不是自生的，而是來自空氣。他推測，海拔越高，空氣一定越潔淨，培養液受細菌的污染也越輕微。為了驗證這一點，他和助手們又先後登上汝拉山區的浦佩山，爬上瑞士的勃朗峯，進行實驗。最後，猜想得到了證實。

巴斯德向科學界報告了自己的實驗結果。許多聽眾無不為他們的冒險獻身所感動，為他們的證據所折服。可是堅持自然發生説的反對派仍繼續起勁地譴責巴斯德，稱他是“馬戲團的演員、騙子和小丑”。攻擊得特別兇的是博物學家布歇（Pouch-et，一譯浦舍）等人。他們還採用以巴斯德之矛攻巴斯德之盾的辦法，在一些瓶子裏灌進乾草浸液而不是酵母湯，並造成真空，趕往比利牛斯山脈的高山瑪拉得塔，登上了比勃朗峯還要高出幾英尺的山巔，打開瓶口。由於他們採用的是乾草浸液，加之沒有加熱，結果在瓶中發現了微生物。藉此，布歇攻擊巴斯德是“以自己的瓶子作為對科學的最後通牒而驚世駭人”，要求在科學院作公開試驗，而且説，如果他們的瓶子有一個打開之後而不立刻生長微生物的話，他們願意承認錯誤。

公開試驗那天，巴斯德應戰準時在科學院委員會做了試驗。可是布歇等卻嚇得沒敢到場。於是委員會作出了贊同巴斯德意見的決定。