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膠體金法
鎖定
- 中文名
- 膠體金法
- 原 料
- 氯金酸
- 輔 料
- 還原劑
- 形成狀態
- 膠體狀態
- 特 點
- 方便快捷、特異敏感、穩定性強
- 檢測技術
- 免疫膠體金電鏡染色法、膠體金免疫層析法等
膠體金法簡介
免疫膠體金技術的基本原理:
膠體金在弱鹼環境下帶負電荷,可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合,由於這種結合是靜電結合,所以不影響蛋白質的生物特性。 膠體金除了與蛋白質結合以外,還可以與許多其它生物大分子結合,如SPA、PHA、ConA等。根據膠體金的一些物理性狀,如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應,加上結合物的免疫和生物學特性,因而使膠體金廣泛地應用於免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。 膠體金標記,實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷,與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸製備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質有很強的吸附功能,可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結合,因而在基礎研究和臨牀實驗中成為非常有用的工具。 免疫金標記技術(Immunogold labelling technique)主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性,在金標蛋白結合處,在顯微鏡下可見黑褐色顆粒,當這些標記物在相應的配體處大量聚集時,肉眼可見紅色或粉紅色斑點,因而用於定性或半定量的快速免疫檢測方法中,這一反應也可以通過銀顆粒的沉積被放大,稱之為免疫金銀染色。
膠體金法特點
膠體金技術具有方便快捷、特異敏感、穩定性強、不需要特殊設備和試劑、結果判斷直觀等優點, 因而特別適合於廣大基層檢驗人員以及大批量檢測和大面積普查等, 具有巨大的發展潛力和廣闊的應用前景。
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膠體金法製備方法
用容量瓶量取200ml超純水加入到500ml錐形瓶中,將錐形瓶置於磁力加熱攪拌器加熱板上,放入磁力攪拌子,打開攪拌旋鈕至適當速度。用移液器吸取2ml 1%氯金酸溶液於上述200ml超純水中,攪拌1min,關閉攪拌旋鈕,打開加熱旋鈕,加熱至沸騰。打開攪拌旋鈕至適當速度,快速加入經微孔濾膜過濾。1%檸檬酸三鈉溶液0.8ml,溶液在2分鐘內由灰色變黑色最後變為紅色,再繼續加熱攪拌10分鐘。關掉加熱旋鈕,適當速度攪拌至室温,定容至200ml,4℃保存。
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膠體金法功能
常用的免疫膠體金檢測技術:
(1)免疫膠體金光鏡染色法
(2)免疫膠體金電鏡染色法
(4)膠體金免疫層析法
將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上,膠體金標記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結合墊上,當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上後,通過毛細作用向前移動,溶解結合墊上的膠體金標記試劑後相互反應,當移動至固定的抗原或抗體的區域時,待檢物與金標試劑的結合物又與之發生特異性結合而被截留,聚集在檢測帶上,可通過肉眼觀察到顯色結果。該法現已發展成為診斷試紙條,使用十分方便。
- 參考資料
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- 1. 楊文勝,高明遠,白玉白等.納米材料與生物技術:化學工業出版社,2005年4月:9
- 2. 膠體金免疫層析技術在動物源性食品中的應用 .食品安全快速檢測網[引用日期2014-05-22]
- 3. 膠體金免疫層析法快速檢測赭麴黴毒素 A研究 .食品安全快速檢測網[引用日期2014-05-22]