發酵試驗

1. 菌株參試菌共49株, 其中大腸埃希菌、變形桿菌 、沙門菌 、志賀菌、克雷伯菌、陰溝桿菌 、類志賀鄰單胞菌、非O1羣霍亂弧菌、葡萄球菌、枯草桿菌、糞腸球菌各2株,假單胞菌15株(均來自本中心菌種室),產鹼型革蘭氏陰性桿菌12株(自糞便標本中分離)。

2. 培養基營養瓊脂、營養肉湯、糖發酵基礎培養基均按使用説明配製使用 。

3 單管法O/F試驗培養基的配製蛋白腖2g,磷酸氫二鉀0.3g,氯化鈉5g,瓊脂粉3g,溴麝香草酚藍0.03g。將上述成分置於1000ml蒸餾水中,加熱溶解, 校PH=7.2~7.4,分成2份,其中1份按3g/L加入葡萄糖,另一份按10g/L加入葡萄糖,然後分別分 裝10×100試管,每管4ml(約佔試管容量的1/2),121 °C高壓蒸汽滅菌15min,直立凝固備用。

4 雙管法O/F試驗培養基的配製在糖發酵基礎培養基內按10g/L加入葡萄糖溶解,分裝10×100試管,每管3 ml,每份2支。其中1支加入液體石蠟1ml封閉液麪,作為厭氧管,另一支不封液麪,作為有氧管。121°C高壓蒸汽滅菌15 min備用。

1 培養將所試菌肉湯培養物劃線接種營養瓊脂,36 °C培養24~ 48h,自同一單個菌落取菌,分別接種單雙管法 O / F 試驗培養基,其中單管法用接種針穿刺接種至管底。同時設不加葡萄糖接種發酵型細菌和加有葡萄糖不種菌的空白對照。36°C培養24h,開始觀察結果,每24h記錄一次,共觀察4d。

2 結果判定標準單管法結果判定標準:發酵型為產酸,整管變黃色;氧化型為表面產酸,僅培養基上部(1/4~1/2)變黃色,下部仍維持普魯士蘭色;產鹼型為不產酸,全管維持普魯士蘭色不變。雙管法結果判定標準:發酵型為兩管均產酸變黃色;氧化型為有氧管(未封液麪)產酸變黃,厭氧管(封閉液麪)不產酸,仍呈普魯士蘭色;產鹼型為兩管均不產酸 , 維持普魯士蘭色不變。 ^[1] 

有些細菌僅在需氧條件下有能力代謝糖產酸,稱為氧化型, 而另一些細菌在需氧和厭氧條件下均能代謝糖產酸, 稱為發酵型,還有些細菌在有氧或厭氧條件下均不能代謝糖類,稱為產鹼型。因此, 在細菌代謝葡萄糖的過程中, 給予有氧和厭氧兩種環境培養,即可分辨細菌的3種代謝類型。將培養基製成半固體, 造成其表面為有氧環境, 底部為厭氧環境, 接種細菌培養後,氧化型細菌僅在培養基表面代謝糖產酸,滲透至培養基上部,使其變黃色, 而下部仍保持原普魯士蘭色 ;發酵型細菌可代謝全部糖產酸,使整管變黃。實驗證明, 使用單管法進行葡萄糖氧化/發酵試驗,經濟、簡便、易行、結果可靠,與雙管法符合率為100%,而且還可通過觀察細菌在半固體中的生長情況,判定其有無動力。作者認為,此法值得在細菌檢驗中推廣應用 。