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TE緩衝液
鎖定
PH緩衝系統對維持生物的正常pH值,正常生理環境起重要作用。多數細胞僅能在很窄的pH範圍內進行活動,而且需要有緩衝體系來抵抗在代謝過程中出現的pH變化。在生物體中有三種主要的pH緩衝體系,它們是蛋白質、重碳酸鹽緩衝體系和磷酸鹽緩衝體系。每種緩衝體系所佔的分量在各類細胞和器官中是不同的。
TE緩衝液三羥甲基氨基甲烷
它可以和重金屬一起作用,但在有些系統中也起抑止的作用。其主要缺點是温度效應,這點往往被忽視。在室温pH是7.8的Tris一緩衝液,在4℃時是8.4,在37℃時是7.4,因此,4℃配製的緩衝液拿到37℃測量時,其氫離子濃度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下,緩衝能力差。
TE緩衝液配製
1×TE Buffer
組成濃度:10mMTris-HCl1mM EDTA PH=8.0
配製量:500ml
配製方法:量取下列溶液於500ml燒杯中
1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml
0.5M EDTA PH=8.0 1ml
向燒杯中加入約400mldd H2O均勻混合;將溶液定容到500ml後,高温高壓滅菌;室温保存.
TE緩衝液作用及用途
TE緩衝液作用
TE緩衝液是弱鹼性,對DNA的鹼基有保護性,(DNA在TE中的穩定性較好,不易被破壞其完整性或產生開環及斷裂),包括提取好的DNA也要放在TE緩衝液中保存.
TE緩衝液用途
TE緩衝液是Tris +EDTA緩衝液,這種緩衝液我們一般用作溶解劑或保持劑,主要是調控PH,TAE是一種電泳緩衝液,主要用於DNA分子的電泳。 TE組成濃度:10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0 配製量:500ml 配製方法:量取下列溶液於500ml燒杯中 1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml 0.5M EDTA PH=8.0 1ml 向燒杯中加入約400mldd H2O均勻混合;將溶液定容到500ml後,高温高壓滅菌;室温保存.
TAE是使用最廣泛的緩衝系統。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質量(TBE中電泳時測出的相對分子質量會大於實際分子質量),且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩衝液快約10%,電泳大於13kb的片段時用TAE緩衝液將取得更好的分離效果,此外,回收DNA片段時也易用TAE緩衝系統進行電泳。TAE的缺點是緩衝容量小,長時間電泳(如過夜)不可選用,除非有循環裝置使兩極的緩衝液得到交換。 50×TAE Buffer 配製方法: 1. 稱量Tris 242g,Na2EDTA.2H2O 37.2g 於1L燒杯中; 2.向燒杯中加入約800ml去離子水,充分攪拌均勻; 3加入57.1ml的冰乙酸,充分溶解; 4.加去離子水定容至1L後,室温保存。