核酸分子雜交技術

核酸分子雜交技術作為最基本、最常用的一種分子生物學方法技術，已經普遍應用於生命科學基礎研究的各個領域。本書詳細介紹了目前核酸分子雜交技術中幾種常用的類型，包括斑點雜交、Southern印跡雜交、Northern印跡雜交、原位雜交、菌落原位雜交、DNA芯片技術等。

本書可作為分子生物學、生物技術、醫學、農學等專業領域的高等院校教師、本科生、研究生的實驗參考用書，也適合上述領域的科研人員參考閲讀。 ^[1] 

第一章核酸的分子結構與分子雜交的基本原理1

第一節發現核酸1

第二節核酸的分子結構5

一、核苷酸的結構5

二、DNA的分子結構9

三、RNA的分子結構18

第三節核酸分子雜交的基本原理及在醫學中的應用21

一、DNA的變性23

二、DNA的復性 25

三、核酸雜交在醫學中的應用簡介27

參考文獻27

第二章核酸分子雜交的類型28

第一節固相核酸分子雜交類型28

一、菌落原位雜交（colony in situ hybridization）28

二、斑點雜交（dot blot）29

三、Southern印跡雜交（Southern blot）30

四、Northern印跡雜交（Northern blot）31

五、組織原位雜交（tissue in situ hybridization）32

六、固相夾心雜交35

七、其他固相雜交類型35

八、固相核酸雜交的幾點説明36

第二節液相核酸分子雜交類型36

一、吸附雜交36

二、發光液相雜交37

三、液相夾心雜交37

四、復性速率液相分子雜交38

參考文獻38

第三章核酸探針的種類、標記及檢測39

第一節核酸探針的種類40

一、DNA探針40

二、cDNA探針41

三、RNA探針41

四、寡核苷酸探針42

第二節核酸探針的標記和檢測43

一、放射性同位素核酸探針的標記和檢測44

二、非放射性核酸探針的標記和檢測47

參考文獻49

第四章核酸分子雜交實驗因素的優化50

一、探針的選擇50

二、探針的標記方法51

三、探針的濃度51

四、雜交率52

五、雜交最適温度52

六、雜交的嚴格性53

七、雜交反應時間54

八、雜交促進劑55

參考文獻55

第五章斑點雜交56

一、概述56

二、雜交方法57

三、斑點雜交的應用61

參考文獻63

第六章Southern印跡雜交64

第一節Southern印跡雜交的基本原理64

一、DNA從凝膠到膜上的轉移方法64

二、Southern雜交膜67

三、核酸探針的標記68

第二節Southern印跡法的基本過程70

一、DNA樣品的酶切和電泳70

二、準備用於轉移的凝膠72

三、DNA從瓊脂糖凝膠轉移到固相支持物73

四、探針標記74

五、雜交75

六、洗膜77

七、雜交結果的檢測77

八、雜交膜的重複使用78

九、注意事項78

十、雜交嚴謹性80

第三節Southern雜交的應用進展81

參考文獻85

第七章Northern印跡雜交86

第一節Northern印跡雜交的基本原理86

第二節雜交方法88

一、 RNA電泳88

二、將變性RNA轉移至尼龍膜92

三、雜交和結果檢測96

四、雜交結果的分析100

第三節Northern雜交的應用與進展101 ^[1] 

一、反向Northern雜交和Northern雜交篩選mRNA表達101

二、高通量反向Northern印跡雜交和Northern雜交102

參考文獻105

第八章原位雜交106

第一節原位雜交組織化學技術的由來及發展106

第二節原位雜交技術的基本方法108

一、玻片準備和組織固定109

二、樣品的預處理110

三、預雜交110

四、雜交111

五、雜交後的清洗112

六、免疫學檢測112

七、觀察結果115

第三節原位雜交的影響因素116

一、影響雜交的主要因素116

二、影響雜交的其他因素118

第四節探針標記120

一、探針標記的直接法和間接法120

二、半抗原標記120

三、標記方法124

四、地高辛、生物素或熒光染料標記探針125

第五節熒光原位雜交137

一、FISH技術的發展史138

二、FISH技術操作140

三、FISH的應用146

四、FISH技術的進展149

參考文獻153

第九章菌落原位雜交154

一、小量細菌克隆的原位雜交篩選155

二、中等量細菌克隆的原位雜交篩選菌落155

三、大量細菌克隆的原位雜交篩選157

四、菌落的裂解及DNA結合於濾膜 158

五、與菌落的影印濾膜進行雜交 159

參考文獻160

第十章DNA芯片技術162

第一節生物芯片與DNA芯片162

一、生物芯片與DNA芯片的概念163

二、DNA芯片的主要類型164

第二節DNA芯片技術的基本原理與方法165

一、芯片的製備165

二、樣品的準備169

三、分子雜交169

四、檢測分析171

第三節DNA芯片技術的應用概況171

一、DNA序列分析172

二、基因突變檢測173

三、基因表達譜分析174

四、基因組研究174

五、基因診斷176

六、藥物研究與開發176

七、其他領域177

參考文獻177

常用緩衝溶液的配製178 ^[1]