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感受態細胞
鎖定
- 中文名
- 感受態細胞
- 外文名
- competent cell
- 主要原理
- 通過處理使細胞的通透性變大
- 性 質
- 活細胞
感受態細胞特點
③受體細胞的修飾酶活性最高,而限制酶活性最低,使轉入的DNA分子不易被切除或破壞;
④受體細胞本身處於非生長繁殖階段(即受體細胞染色體相對穩定);
感受態細胞製作方法
感受態細胞CaCl2法
1.將快速生長的大腸桿菌置於經低温(0℃)預處理的低滲氯化鈣溶液中,便會造成細胞膨脹,同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構,促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來,離開所在區域,誘導細胞成為感受態細胞
2.此時,將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激(90s),細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動,並隨機出現許多間隙,外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過複製、表達,實現遺傳信息的轉移,使受體細胞出現新的遺傳性狀。
感受態細胞電轉法
感受態細胞意義
將構建好的載體轉入感受態細胞進行表達,不僅可以檢驗重組載體是否構建成功,最主要的是感受態細胞作為重組載體的宿主可以進行後續實驗,如蛋白質表達純化等工作。
感受態細胞其他基因傳遞方法
詳見基因槍法