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感受態細胞

鎖定
感受態細胞(competent cell):理化方法誘導細胞,吸收周圍環境中的DNA分子,使其處於最適攝取和容納外來DNA的生理狀態。
主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大,直觀的説,使得細胞膜表面出現一些孔洞,便於外源基因或載體進入感受態細胞。由於細胞膜的流動性,這種孔洞會被細胞自身所修復。
中文名
感受態細胞
外文名
competent cell
主要原理
通過處理使細胞的通透性變大
性    質
活細胞

感受態細胞特點

①細胞表面暴露出一些可接受外來DNA的位點(以溶菌酶處理,可促使受體細胞的接受位點充分暴露);
②細胞膜通透性增加(用鈣離子處理,可使膜通透性增加,使DNA直接穿過質膜進入細胞);
③受體細胞的修飾酶活性最高,而限制酶活性最低,使轉入的DNA分子不易被切除或破壞;
④受體細胞本身處於非生長繁殖階段(即受體細胞染色體相對穩定);
⑤不存在載體的篩選基因,多采用限制酶陰性、修飾酶陽性的大腸桿菌作為受體細胞。 [1] 

感受態細胞製作方法

感受態細胞CaCl2法

1.將快速生長的大腸桿菌置於經低温(0℃)預處理的低滲氯化鈣溶液中,便會造成細胞膨脹,同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構,促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來,離開所在區域,誘導細胞成為感受態細胞
細胞壁通透性發生變化,極易與外源DNA相粘附並在細胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羥基-磷酸鈣複合物。
聯合其它的二價金屬離子(如Mn、Co)、DMSO或還原劑等物質處理細菌,則可使轉化率提高100~1000倍。
2.此時,將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激(90s),細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動,並隨機出現許多間隙,外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過複製、表達,實現遺傳信息的轉移,使受體細胞出現新的遺傳性狀
3.將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養,篩選出帶有外源DNA分子的陽性克隆

感受態細胞電轉法

電擊法不需要預先誘導細菌的感受態,依靠短暫的電擊,促使DNA進入細菌,轉化率最高能達到109~1010轉化子/ug閉環DNA。因操作簡便,愈來愈為人們所接受。

感受態細胞意義

將構建好的載體轉入感受態細胞進行表達,不僅可以檢驗重組載體是否構建成功,最主要的是感受態細胞作為重組載體的宿主可以進行後續實驗,如蛋白質表達純化等工作。

感受態細胞其他基因傳遞方法

參考資料
  • 1.    葉棋濃.生物實驗室系列 現代分子生物學技術與實驗技巧[M].北京:化學工業出版社.2015.