感受態

受體細胞經過一些特殊方法（如：CaCl₂，RuCl等化學試劑法）的處理後，細胞膜的通透性發生變化，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態細胞。

例如野生型大腸桿菌並不容易轉化，這是由於DNA無法進入野生型大腸桿菌的細胞。經過多年的努力，科學家們發現了一種方法可以增加細胞吸收外源DNA的效率。那就是用化學方法處理細胞，使其改變膜對DNA的通透性。這種細胞就稱為感受態細胞，即細胞處於能攝入核酸分子時的生理狀態。這種方法已經成為基因工程的常規技術，它對於我們利用體外DNA重組技術來了解真核和原核生物的基因功能特別重要。細菌的感受態有兩種類型：一種是自然感受態（Natural competence），自然感受態細菌可以自由地吸收DNA，通過它來進行遺傳轉化；另一種是人工感受態（Artificial competence），在這種轉化中，細菌發生改變使得它們能攝入外源DNA。枯草芽孢桿菌屬於能夠發展為自然感受態的細胞，大腸桿菌就屬於需要人工處理的細胞。

感受態細菌細胞的轉化採用氯化鈣的方法。不含有質粒的大腸桿菌菌株在室温下使其解凍並加入40mL S.O.C 的液體培養基。在37 ℃培養1h , 然後將其轉移到37 ℃搖牀上以200r /min 速度培養2 ～3h， 直到OD600 達到0.2 ～ 0.4。不同細菌菌株的最適宜OD600 是不同的。在4 ℃下以8000r /min 的速度離心1min， 然後用一半體積(20 mL)已滅菌的預冷的TB(CaCl2)溶液進行懸浮, 並在冰上保存25 min。如上進行另一次離心後，所得到的細胞沉澱用十分之一體積(4mL)預冷的TB (CaCl2)溶液進行懸浮獲得感受態細胞。感受態細胞可於4 ℃下保存3d。

感受態細胞的保存

轉移1.6 mL的感受態細胞懸浮液至已消過毒的冷藏管內，並加入已滅菌的0.4 mL甘油使最終濃度達到20%，混勻。甘油儲液可在- 4 ℃，- 20 ℃和- 70 ℃下分別儲存待用 ^[2]  。

轉化效率按下公式計算:轉化效率(cfu·μg -1)=(每皿轉化子平均數×菌懸液稀釋倍數) 質粒微克數。實驗涉及的一般轉化, 採用pUC19質粒。