-
大腸桿菌菌株
鎖定
- 中文學名
- 大腸桿菌菌株
- 拉丁學名
- Escherichia coli
- 別 稱
- 大腸埃希氏菌
- 界
- 動物界
大腸桿菌菌株簡介
大腸桿菌(Escherichia coli,E.coli) 革蘭氏陰性短桿菌,大小0.5×1~3微米。周生鞭毛,能運動,無芽孢。能發酵多種糖類產酸、產氣,是人和動物腸道中的正常棲居菌,嬰兒出生後即隨哺乳進入腸道,與人終身相伴,幾乎佔糞便乾重的1/3。國家規定,每毫升飲用水中的菌落總數小於100,每100毫升水中不得檢出總大腸菌羣。
大腸桿菌在生物技術中的應用:大腸桿菌作為外源基因表達的宿主,遺傳背景清楚,技術操作簡單,培養條件簡單,大規模發酵經濟,倍受遺傳工程專家的重視。大腸桿菌是應用最廣泛,最成功的表達體系,常做高效表達的首選體系。它的基因組DNA為擬核中的一個環狀分子,同時可以有多個環狀質粒DNA。大腸桿菌細胞的擬核有1個DNA分子,長度約為4 700 000個鹼基對,在DNA分子上分佈着大約4 400個基因,每個基因的平均長度約為1 000個鹼基對。分子生物學中常用的大腸桿菌菌株,除了少數幾個例外,在DNA重組實驗中所用的菌株大多數都是大腸桿菌菌株K12的衍生物。這些突變菌株在遺傳、生化代謝等方面均有不同程度的差異,適合於做不同自菌株基因。
大腸桿菌菌株分類及區別
1:DH5a菌株
DH5a是一種常用於質粒克隆的菌株。E.coliDH5a在使用pUC系列質粒載體轉化時,可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α-互補。可用於藍白斑篩選鑑別重組菌株。
基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1
2:BL21(DE3)菌株
基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)
3:BL21(DE3)pLysS菌株
該菌株含有質粒pLysS,因此具有氯黴素抗性。PLysS含有表達T7溶菌酶的基因,能夠降低目的基因的背景表達水平,但不干擾目的蛋白的表達。該菌適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-,ompThsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS,Camr
4:JM109菌株
該菌株在使用pUC系列質粒載體進行DNA轉化或用M13phage載體進行轉染時,由於載體DNA產生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進行α-互補,從而顯示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鑑別重組體菌株
基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’
5:TOP10菌株
該菌株適用於高效的DNA克隆和質粒擴增,能保證高拷貝質粒的穩定遺傳。
基因型:F-,mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC),φ80,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1,araΔ139Δ(ara-leu)7697,galU,galK,rps,(Strr)endA1,nupG
6:HB101菌株
該菌株遺傳性能穩定,使用方便,適用於各種基因重組實驗
基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1M110或SCS110
大多數大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,後者在CCA/TGC序列的第一個胞嘧啶C-5位置上引入甲基。常用的菌株都會產生dam,dcm,從而受到甲基化的影響.部分限制性內切酶對甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的內切酶説明中均有説明。大多數酶切位點的甲基化不影響切割,而有些會影響,如XbaI,BclI等。而且甲基化只發生在特定序列,以XbaI為例,只有在位點序列旁出現GA或TC,該XbaI位才會被甲基化。而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法:
(1)選用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA識別切割位點與MboI相同;但不受甲基化影響;