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X-Gal
鎖定
- 中文名
- 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷
- 外文名
- X-Gal
- 化學式
- C14H15BrClNO6
- 分子量
- 408.63
- CAS登錄號
- 7240-90-6
X-Gal基本信息
X–gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,水解後呈藍色。基於這個特點,pUC系列載體DNA(或其他帶有lacZ基因載體DNA)以lacZ 缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體載體DNA進行轉染時,如果在平板培養基中加入X–gal和IPTG,由於β–半乳糖苷酶的α–互補性,可以根據是否呈現白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑選出基因重組體。
X-Gal使用方法
首先把X-gal配製成20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液(-20℃避光保存),然後在100 ml的瓊脂培養基中,加入200 μl的上述溶液、100 μl的IPTG(24 mg/ml)和100 μl的Amp(100 mg/ml),製作成X-gal、IPTG、Amp平板培養基。當DNA片段插入至pUC系列載體(或其他帶有lacZ、Amp基因載體),然後轉化至lacZ缺失細胞中後,塗布上述的X–gal、IPTG、Amp平板培養基,可根據長出菌體的藍白色,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。
X-Gal注意事項
- 培養噬菌體時,Top agar中的添加量為:50 μl/3 ml(20mg/ml)。
- 含有X-gal的培養基4℃避光保存,須在1~2周內使用。