DNase I

DNase I水解單鏈或雙鏈DNA後的產物，5'端為磷酸基團，3'端為羥基。DNase I活性依賴於鈣離子，並能被鎂離子或二價錳離子激活。鎂離子存在條件下，DNase I可隨機剪切雙鏈DNA的任意位點；二價錳離子存在條件下，DNase I可在同一位點剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個核苷酸突出的粘末端。

特點:不含RNase(RNasefree)，可以用於各種RNA樣品的處理。提供了用於DNaseI失活所需的EDTA。

用途:製備不含DNA的RNA樣品;RT-PCR反應前RNA樣品中去除基因組DNA等可能的DNA污染;體外T7, T3, SP6等RNA聚合酶(RNA Polymerases)催化的RNA轉錄後去除DNA模板;DNaseI足跡實驗(DNaseIfootprinting)研究DNA-蛋白質相互作用;缺口平移(nick translatioin);產生DNA隨機片斷文庫;細胞凋亡TUNEL檢測中部分剪切基因組DNA作為陽性對照。

來源:從牛胰腺純化得到。

分子量:約32kDa(單體)。

活性定義:37℃10分鐘內，將能夠完全降解1μg pBR322質粒DNA所需的酶量定義為1個活性單位。

活性檢測條件:40mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgSO₄，1mM CaCl₂，1μg of pBR322 DNA。

純度:不含其它DNA內切酶和外切酶，不含RNA酶。

酶儲存溶液:50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl₂，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X):100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，25mM MgCl₂，1mM CaCl₂。

失活或抑制:加入EDTA至終濃度為2.5mM後，65℃加熱10分鐘可使DNaseI失活。酚氯仿抽提也可以使DNaseI失活。金屬離子螯合劑，達到毫摩爾/升濃度的鋅離子，0.1%的SDS，DTT、巰基乙醇等還原劑，50-100mM以上鹽濃度均對DNaseI有顯著抑制作用。

此外，在對染色質進行低DNaseI處理，可發現酶切割將先發生在少數特異性位點上，這些特異性位點叫做DNaseI超敏感位點（DNaseI Hypersensitive Sites，DHSs ^{[1]  [2]}  ），它實際上是一段長約200bp的DNA序列特異暴露的染色質區域，甲基化程度較低，富含HMG14,HMG17蛋白，一般在轉錄起始附近或者相關部位。