擴增片段長度多態性

擴增片段長度多態性(AFLP)

Amplified Fragment Length Polymorphism

對基因組DNA進行雙酶切，形成分子量大小不同的隨機限制片段，再進行PCR擴增，根據擴增片段長度的多態性的比較分析，可用於構建遺傳圖譜、標定基因和雜種鑑定以輔助育種。

AFLP 是 RFLP 與PCR相結合的產物，其基本原理是先利用限制性內切酶水解基因組 DNA 產生不同大小的 DNA 片段，再使雙鏈人工接頭的酶切片段相連接，作為擴增反應的模板 DNA，然後以人工接頭的互補鏈為引物進行預擴增，最後在接頭互補鏈的基礎上添加 1—3個選擇性核苷酸作引物對模板 DNA 基因再進行選擇性擴增，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離檢測獲得的DNA擴增片段，根據擴增片段長度的不同檢測出多態性。

引物由三部分組成：與人工接頭互補的核心鹼基序列、限制性內切酶識別序列、引物3’端的選擇鹼基序列（1—10 bp）。接頭與接頭相鄰的酶切片段的幾個鹼基序列為結合位點。

該技術的獨特之處在於所用的專用引物可在知道 DNA 信息的前提下就可對酶切片段進行PCR 擴增。為使酶切濃度大小分佈均勻，一般採用兩個限制性內切酶，一個酶為多切點，另一個酶切點數較少，因而 AFLP 分析產生的主要是由兩個酶共同酶切的片段。AFLP 結合了 RFLP 和 RAPD兩種技術的優點，具有分辨率高、穩定性好、效率高的優點。但它的技術費用昂貴，對 DNA 的純度和內切酶的質量要求很高。

儘管 AFLP 技術誕生時間較短，但可稱之為分子標記技術的又一次重大突破，被認為是一種十分理想、有效的分子標記。