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pc12
鎖定
- 中文名
- pc12
- 來 源
- 腎上腺嗜鉻細胞瘤
- 形 態
- 多角型細胞
- 生長特性
- 貼壁較松,容易成團
- 學 科
- 生物
- 領 域
- 生命科學
pc12簡介
研究培養PC12細胞動力學的主要方法是蓋玻片培養法。在神經生長因子誘導的PC12細胞傳代培養過程中,按一定時間間隔放置蓋玻片。待PC12細胞鋪滿蓋玻片,將其取出,經吉姆薩染色,在光學顯微鏡下可觀察到培養PC12細胞隨培養時間展開的演化過程。裸核PC12細胞是演化形成神經細胞和膠質細胞的共同的原始幹細胞,其演化的最初表現為細胞質的出現,並逐漸增多,表面形成多數細小的營養性突起,而後PC12細胞系分化形成神經細胞演化系和膠質細胞演化系。狹義的PC12細胞是指分化成為神經細胞與膠質細胞之前的PC12細胞;廣義的PC12細胞則包括狹義的PC12細胞及其演化所形成的所有神經細胞與膠質細胞。
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pc12實驗
傳代:吸去培養液。 加入新的培養液,用吸管吹下細胞或用手拍打培養瓶或刮下細胞到培養液中,用移液器把細胞吹散。加適量的細胞到新的培養器皿中。(以1:4為宜,傳代期間2-3天更換培養液)
凍存:95%培養液+5%DMSO凍存於液氮。
PC細胞培養和向神經元誘導分化
pc12細胞是從大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤克隆的細胞株,主要分泌產物為兒茶酚胺類遞質包括多巴胺、去甲腎上腺素等。膜上有NGF受體,受生理水平NGF誘導後,它們停止分裂,長出神經突起,分化為具有交感神經元特性的細胞,常被用於分析神經元分化和NGF作用分子機制的研究,也被用於研究生長因子調節神經細胞基因表達改變的機制。
(一)材料和方法
1、pc12細胞的復甦和培養
從液氮罐中取出盛有pc12細胞的塑料螺口小瓶,立即投入37℃温水中,並不時搖動令其儘快融化,然後從37℃水浴中取出塑料螺口小瓶,用酒精消毒後用吸管吸出細胞懸浮液,注入離心管並加入10倍培養液,混合後離心(一千轉每分鐘,五分鐘)除去上清液,再重複用培養液洗一次。然後用培養液稀釋成1×104個每毫升密度的細胞懸液,接種於75平方釐米塑料培養瓶中,每皿十毫升,置於37度含百分之十二氧化碳的培養箱內進行培養。培養液由百分之九十的DMEM、百分之五胎牛血清、百分之五馬血清、0.01%谷氨醯胺組成。
2、pc12細胞的擴增
3、體外誘導pc12細胞向交感神經元樣細胞分化
取傳五代以上pc12細胞,經消化分散後,製成5×105每毫升密度的細胞懸液,接種於塗有小牛皮膠的35mm塑料培養皿中,每皿2ml,置於36度,10%CO2的培養箱內進行培養。培養液由90%DMEM,5%馬血清、NGF20ng每毫升和谷氨醯胺0.10g/L組成。每週換液兩次,每次更換一半新鮮培養液。
(二)結果
1、pc12細胞 的生長髮育和形態學特徵
pc12細胞種植後8小時,生長良好的pc12細胞開始分裂增殖並凝聚成團生長,pc12細胞呈圓形,胞體周圍有暈光。培養5~10天后,分裂增殖的pc12細胞已形成密集的細胞簇,佈滿整個培養瓶。
分散的pc12細胞在含NGF的培養條件培養3天后,pc12細胞開始停止分裂。並逐漸分化為具有交感神經元特徵的細胞,開始長出神經突起,培養5天后,大多數pc12細胞轉變為類似於交感神經元的形態,突起逐漸增多並延長,形成稀疏的網絡。隨着培養時間的延長,交感神經元樣細胞的胞體逐漸增大,胞體主幹和分支逐漸延長並增粗,經NSE免疫組織化學染色呈陽性反應。
pc12細胞分裂
一、對稱性PC12細胞分裂
培養PC12細胞二裂類分裂出現較晚,卻是更常見的PC12細胞直接分裂方式,二裂類PC12細胞分裂以橫裂為主,有對稱性和非對稱性之別。演化較晚期神經細胞的分裂過程又分核分裂和細胞分裂兩個階段。
1、對稱性PC12細胞核橫裂
PC12細胞核橫裂以橫縊型核橫裂為主。最早的橫縊型核橫裂見於裸核細胞和寡質細胞,只可見環形核縊痕,因時程太短,其他分裂細節不易觀察。分化的神經細胞核橫裂初期見細胞核赤道部出現環形淺凹痕,繼之凹痕逐步加深,而後將要分開的兩個子細胞核僅留部分核質相連,接着相連的核質減少,連接部逐漸變細(,繼之僅留極細的核質細絲相連,最後細絲斷開,形成兩個細胞核。
2、對稱性PC12細胞(質)分裂
細胞質分裂之初,有較多細胞質相連,隨着兩細胞距離變遠連接部逐漸變細。當兩細胞遠離時連接部可變得細長,以致成為胞質細絲,可見兩神經細胞之間的胞質細絲除單向或雙向神經突起接觸外,確實有細胞質問橋存在。細胞質間橋細絲繼續拉長可致斷裂,形成類似突觸樣連接,但遠不及相向兩突起的突觸連接複雜。
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二、非對稱性PC12細胞分裂
在PC12細胞演化進程中,除對稱性二裂類細胞分裂外,也常見PC12細胞的非對稱性分裂,主要是演化程度不對稱和運動狀態不對稱。
(一)演化程度不對稱性PC12細胞分裂
演化程度不對稱性PC12細胞分裂是指分裂的兩個細胞演化程度有明顯差別,細胞的演化程度主要依據細胞核的演化程度判定。
1、細胞核演化進程 細胞核也有其演化進程,識別標準是細胞核的嗜色性。隨着演化進展,細胞核嗜鹼性逐漸減弱,嗜酸性逐漸增強。在吉姆薩染色標本上可明顯區分細胞核嗜色性差異,幼稚細胞核強嗜鹼性,深藍色;演化晚期細胞嗜鹼性減弱,或顯示嗜酸性,呈紅色。用甲綠一哌若寧染色的PC12細胞鋪片,也可觀察到培養PC12細胞核的嗜色性演變。幼稚的PC12細胞核呈深綠色,少量細胞質呈淡紅色,隨着細胞演化齡增加,細胞核變成灰藍色,並逐漸淡染,細胞質增加,哌若寧着色明顯。
2、細胞分裂進程 演化程度不對稱性PC12細胞分裂表現為綠色細胞核與灰色細胞核的分裂。在吉姆薩染色標本上,早期可見細胞核分成紅藍兩部分,而後分成兩個明顯不同的細胞核。其細胞質嗜色性也有明顯差異,即成為兩個演化程度不同的細胞。兩個細胞核距離漸遠,細胞質連接部分由多變少,以至僅留胞質細絲相連,最終完全斷離,成為兩個獨立的、演化程度不同的細胞。演化程度不對稱性細胞分裂是細胞分化的重要細胞學機制。
(二)PC12細胞動態不對稱性細胞分裂