ODS柱

ODS柱是十八烷基硅烷鍵合硅膠填料（Octadecylsilyl，簡稱ODS）。這種填料在反相色譜中發揮着極為重要的作用，它可完成高效液相色譜70～80%的分析任務。由於C18（ODS）是長鏈烷基鍵合相，有較高的碳含量和更好的疏水性，對各種類型的生物大分子有更強的適應能力，因此在生物化學分析工作中應用的最為廣泛。

近年來，為適應氨基酸、小肽等生物分子的分析任務，又發展了CH、C3、C4等短鏈烷基鍵合相和大孔硅膠（20～40μm）。

按鍵合到基質上的官能團可分為：

⑴反相柱：填料是非極性的，官能團為烷烴，例如：C18（ODS）、C8、C4等。

⑵正相柱：填料是極性的，官能團為－CN氰基、－NH₂氨基等。

⑶離子交換鍵合相： 陽離子官能團：－SO₃H磺酸基、－COOH羧基等。 陰離子官能團：―R₄N+季銨基、-氨基等。 ( 由於硅膠基質的鍵合相只能在pH=2～7.5的範圍內使用，而離子交換色譜要求有更寬的pH範圍，因此其基質仍主要使用聚苯乙烯和二乙烯苯。)

流動相：

反相色譜最常用的流動相及其沖洗強度如下： H₂O＜甲醇＜乙腈＜乙醇＜丙醇＜異丙醇＜四氫呋喃。最常用的流動相組成是："甲醇-H₂O"和"乙腈-H₂O"，但由於乙腈具有一定的毒性，通常優先考慮"甲醇-H₂O"流動相。 反相色譜中，溶質按其疏水性大小進行分離，極性越大疏水性越小的溶質，越不易與非極性的固定相結合，所以先被洗脱下來。流動相的pH對樣品溶質的電離狀態影響很大，進而影響其疏水性，所以在分離肽類和蛋白質等生物大分子的過程中，經常要加入修飾性的離子對物質，最常用的離子對試劑是三氟乙酸（TFA），使用濃度為0.1%，使流動相的pH值為2～3，這樣可以有效地抑制氨基酸上α羧基的離解，使其疏水性增加，延長洗脱時間，提高分辨率和分離效果。 完全離子化的溶質，例如強酸或強鹼，其在反相鍵合相上的保留值很低，近於死時間流出，不能進行分析。根據離子對色譜的原理將一種與樣品離子電荷（A+）相反的離子（B－），稱為對離子，加入到流動相中，使其與樣品離子結合生成弱極性的離子對，即中性締合物，從而增強了樣品的疏水性，加大了保留值，改善了分離效果。

正相色譜常用的流動相及其沖洗強度的順序是： 正己烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜異丙醇。其中最常用的是正己烷，雖然其價格較貴，但80%的順、反和鄰位、對位異構體仍然要用正相色譜來進行分離。

流動相的選擇原則是：①樣品易溶，且溶解度儘可能大。②化學性質穩定，不損壞柱子。③不妨礙檢測器檢測，紫外波長處無吸收。④粘度低，流動性好。⑤易於從其中回收樣品。⑥無毒或低毒，易於操作。⑦易於製成高純度，即色譜純。⑧廢液易處理，不污染環境。