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銀染
鎖定
銀染應用
銀染實驗操作流程
銀染實驗目的
檢測聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質。
銀染實驗原理
在鹼性條件下,用甲醛將蛋白帶上的硝酸銀(銀離子)還原成金屬銀,以使銀顆粒沉積在蛋白帶上。染色的程度與蛋白中的一些特殊的基團有關,不含或者很少含半胱氨酸殘基的蛋白質有時候呈負染。銀染的詳細機制還不是非常清楚。
銀染實驗操作程序
固定:30min或者更長時間 100ml 乙醇 40% 乙醇
25ml冰醋酸 10% 冰醋酸
加水到250ml
致敏:30min 75ml乙醇 30%乙醇
17g乙酸鈉 28.2g三水乙酸鈉
0.5g硫代硫酸鈉(大蘇打)
加水到終體積250ml
水洗:3 x 10min
銀染:20min 0.625g AgNO3
100ul 37%甲醛(在使用前加入)
加水到終體積250ml
水洗:2 x 1 min (注意把握時間,水洗時間長顯色速度慢,點的顏色偏黃色)
顯色:視情況而定 6.25 g Na2CO3
50ul 37%甲醛(在使用前加入)
加水到終體積250ml
終止:10min 3.65g EDTA. Na2.2H2O或者1g甘氨酸
加水到終體積250ml
保存:1%冰醋酸,4 ℃
銀染注意事項
1.固定時間較長,則加一步水洗30min,以免膠太脆而破碎。
2.甲醛在使用前加入。
3.最好多配製一份顯色液,第一次顯色到溶液變混濁時換一份顯色液,顯色到點清晰。
4.顯色過程很快,要注意把握時間,避免染色過度。
5.銀染液和顯色液需要預冷。
6.所用器皿要很潔淨,不用手直接接觸,以免雜蛋白污染!