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超薄切片

鎖定
超薄切片(Ultrathin sectioning) 系供電子顯微鏡 [1]  觀察用的切片。由於電子穿透組織的能力低, 所以供電子顯微鏡觀察用的切片要求極薄(一般厚度為40~50 nm) ,即為超薄切片 [2] 
中文名
超薄切片
外文名
ultrathin section
領    域
應用科學
學    科
生物學
專    業
醫學,動物學,植物學
相關技術
電子顯微鏡,超薄切片技術

超薄切片前言

為了觀察生物體的微細結構,電子顯微鏡所用的超薄切片, 需要經過了解取材的基本要求,取材和製備超薄切片的過程, 即為透射電鏡 [1]  標本(超薄切片)的製備 [3] 

超薄切片取材的基本要求

組織從生物活體取下以後,如果不立即進行適當處理,會由於細胞內部各種酶的作用,出現細胞自溶現象。此外,還可能由於污染,微生物在組織內繁殖使細胞的微細結構遭受破壞。因此,為了使細胞結構儘可能保持生前狀態,必須做到快、小、準、冷:
(1).動作迅速,組織從活體取下後應在最短時間內 (爭取在1分鐘內) 投入2.5%戊二醛固定液
(2).所取組織的體積要小,一般不超過1mm×1mm×1mm。也可將組織修成1mm×1mm×2mm大小長條形。因
固定劑的滲透能力較弱,組織塊如果太大,塊的內部將不能得到良好的固定。
(3).機械損傷要小,解剖器械應鋒利,操作宜輕,避免牽拉、挫傷與擠壓。
(4).操作最好在低温(0℃~4℃)下進行,以降低酶的活性,防止細胞自溶
(5).取材部位要準確。

超薄切片取材

將取出的組織放在潔淨的蠟版上,滴一滴預冷的固定液,用兩片新的、鋒利的刀片成“拉鋸式”將組織切下並修小,然後用牙籤或鑷子將組織塊移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果組織帶有較多的血液和組織液,應先用固定液洗幾遍,然後再切成小塊固定。

超薄切片超薄切片的製備

製備超薄切片的設備為超薄切片機,使用的刀為玻璃刀或鑽石刀。為了能切成薄片,包埋標本的包埋劑一定要達到一定的硬度,通常是用樹脂聚合包埋。
方法與步驟:鋨酸戊二醛固定樣品→丙酮逐級脱水→環氧樹脂包埋_→以熱膨脹或機械伸縮的方式切片_→重金屬(鈾,鉛)鹽染色.
參考資料
  • 1.    John J. Bozzola, Lonnie D. Russell.Electron Microscopy:Jones & Bartlett Learning,1998
  • 2.    中國農業百科全書總編輯委員會.中國農業百科全書 之136 製作電鏡超薄切片.北京:中國農業百科全書編輯部,1988
  • 3.    Norman Reid, Julian E. Beesley.Sectioning And Cryosectioning For Electron Microscopy (Practical Methods In Electron Microscopy):Elsevier Science Ltd,1991