肝細胞移植

1993年Mito等人第一次報道了肝細胞移植在治療慢性重型肝炎中的應用。1998年Fox等人報道了應用該方法治療小兒Crigler-Najjar Ⅰ型疾病，18個月後膽紅素水平降低了60%。1998年美國FDA6880條款通過了人類肝細胞體內移植可作為終末期肝病的一項有效的治療技術，並於當年通過了美國FDA認證。國內尚無任何一家醫院開展此項醫療技術。302醫院具備掌握該技術的必備人員即在匹茲堡大學器官移植中心從事該技術基礎和臨牀應用博士後工作的楊永平同志回院工作，具有通過GMP認證的生產車間和必需設備，並且完成了肝細胞移植所有臨牀前實驗工作。該技術通過總後衞生部組織的專家評審，現應用於臨牀，服務終末期肝病和遺傳性肝臟代謝性疾病的患者。

Mito等率先將肝細胞移植應用於治療肝衰竭的患者，其方法是：切除三段肝左葉，分離肝細胞，即刻注射10000000~-600000000個肝細胞於患者脾臟，隨訪患者症狀的改善情況。Liu等則是將肝細胞和骨髓下細胞用膠囊共同包裹後進行移植，然後評價移植後其去除氨的能力及治療小鼠高膽紅索血癥的效果，結果證明：與單獨的肝細胞移植相比，用膠囊共同包裹後進行移植的方法，不僅在體外可增強去除氨的能力，而且還可降低體內總膽紅素水平，移植成功的幾率也大大增加。

理論上，肝臟本身的微環境及門靜脈血中的營養成分均對植入的肝細胞有益；門靜脈內或肝實質內應是供體肝細胞理想的植人場所。國外有些實驗發現:門靜脈內移植會導致嚴重的肝損傷和廣泛的肝壞死，移植早期實驗動物的病死率明顯增加這可能是由於植人的肝細胞直接阻礙受體肝臟的血液供應，引起肝臟的梗塞和壞死。這就嚴重限制了肝細胞的植人數覺，直接降低了其對受體的代謝支持功能。腹腔內HcT，由於技術簡單及可反覆多次進行等優點故首先被選用於 HCT。先期腹腔內移植顯示出令人鼓舞的短期療效但腹膜腔無法為肝細胞的長期附着和生存提供足夠支持，移人的肝細胞壽命短暫。改進後採用的聯合移植肝細胞與非實質細胞或自體基質，或以膠原包裹或藻酸鹽微囊化肝細胞均可延長肝細胞在腹膜腔內的生存時間。近來，Rahman，等四用聯合包裹HepG細胞和支持細胞的方法延長了移植細胞在鼠腹膜腔的生存時間微囊化方法與局部免疫抑制的結合可能是一種有價值的HCT策略。

脾實質內HCT。脾臟已被認為是HCT的最佳部位。植人脾內的肝細胞可長期存活、增殖，並保持肝細胞的形態和功能上。雖然肝細胞移植人休內其他部位如胰腺、肺臟、腎脂

肪囊、皮下組織、肌肉等處也有一定的代謝支持功能，但均不如脾內移植優越。因此脾實質的移植可能是未來最有前途的移植選擇。

這種移植具有來源廣泛的顯著優點。最常用的異種肝細胞源是豬肝，它能提供與人肝結構相似、功能相近的肝細胞。Nishitai等在免疫缺陷鼠的脾臟內移植豬肝細胞，發

現新鮮分離的豬肝細胞較之培養後、4℃保存或凍存後的豬肝細胞在移植後具有更好的活力和分泌功能。提示新鮮分離的豬肝細胞是首選的異種肝細胞源。

這是最理想的細胞來源。Chen等用含肝細胞生長因子變異體的培養基培養人肝細胞作動物對照實臉，證實在體外培養過程中該變異體能維持人肝細胞的特異性功能。

胎肝細胞是由流產胎兒肝臟分離所得的肝細胞及其前體具有分化增殖能力強、免疫原性弱及更能抵抗低温貯存損傷等優點。

它是一種具有良好特徵性的可移植肝細胞，可以解決增殖難題，具有成為取之不蠍的潛力。國內有學者以重組質粒SV40LT/pcDNA3.1經脂質體轉染來源於正常人肝細胞，成功構建水生化人源性肝細胞系HepLL表明HepLL 具有正常人肝細胞的形態特徵和生物學功能。

由Peteoen於1999年最先提出分為肝源性和非肝源性兩大類。較為明確的是前者，主要包括肝卵圓細胞;後者包括成體肝細胞和胚胎幹細胞兩大類。關於成體幹細胞的研究主要聚焦乾骨髓幹細胞向肝細胞的分化研究。國內也開展很多關於骨髓源性肝幹細胞方面的研究，蔡雲峯等建立動物模型應用免疫磁珠法分離骨髓幹細胞，在休外培養誘導分化，免疫組化技術檢測，證明β2:m一細胞在體外具有向肝細胞分化的能力。

HCT現主要用於治療以下疾病:

(1)各種原因引起的急、慢性肝衰竭，如肝腫瘤、終末期肝硬化；

(2)肝代謝疾病，如a一1抗胰蛋白酶缺乏；

(3)肝臟疾病的基因治療，如家族性高膽固醇血癥。

大量的臨牀、實驗研究表明，對於患有致命性肝臟疾病的治療，HCT較OLT具有以下優點：

(1)HCT的創傷對受體的打擊相對較小，易操作，安全性好；

(2)OLT供體缺乏，HCT可部分解決供體短缺的問題；

(3)HCT排異反應低於OLT；

(4)植入的肝細胞能較快地發揮合成、解毒和促進膽紅素排泄等作用；

(5)HCT還可通過複雜的體液分子機制，促進宿主殘餘肝細胞增殖和肝功能的恢復；

(6)肝臟隨着肝細胞的再生而發揮其正常功能；

(7)具有基因修飾的可能性。

HCT歷經30餘年的不斷研究，已從動物模型階段開始進人初步臨牀試驗。雖然HCT是當前熱點之一，但在其常規用於治療人類疾病之前還有許多有待解決的向題：

(1)移植肝細胞所需數量大，如何才能從切取的肝臟上最大限度地獲得分離的肝細

胞，如何大量培養和保存肝細胞，怎樣從有病變的肝臟中分離和純化肝細胞；

(2)肝細胞低温凍存復甦後存活率不高，功能受到不同程度影響；

(3)如何建立細胞耐受和抑制排斥反應的新策略；

(4)體外培養並大量擴增原代人肝細胞的技術能力有限；

(5)HCT適宜的移植部位、數量和方式，在病理機體情況下，哪些器官或部位最適合移植肝細胞；

(6) HCT的指徵和不同程度應用的劑量以及臨牀效用的監側；

(7)HCT基因治療適宜載體的構建。

2004年10月31日，解放軍302醫院對外宣佈，該院多名專家聯手在10月29日為一名來自遼寧的48歲患者成功實施了肝細胞體內移植手術。經過兩天的嚴密監測，患者生命體徵正常，身體恢復良好，無任何急性排異反應。據瞭解，這是迄今中國開展的首例肝細胞移植手術。此次手術的成功，標誌着中國在治療急慢性重型肝炎及遺傳性肝臟代謝性疾病方面獲得了重大突破，表明中國在這一技術領域上已達到國際先進水平。 ^[1]