硅膠柱層析

極性小的用乙酸乙酯：石油醚洗脱；極性較大的用甲醇：氯仿洗脱；極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸洗脱；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸

1.稱量。200-300目硅膠，稱30-70倍於上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的硅膠H。幹硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。

2.攪成勻漿。加入幹硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。如果洗脱劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脱劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。

如果不能攪成勻漿，説明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預先用無水硫酸鈉久置乾燥。氯仿用無水氯化鈣乾燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。

3.裝柱。將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約1/3體積石油醚（氯仿），裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內。隨着沉降，會有一些硅膠沾在蓄液球內，用石油醚（氯仿）將其衝入柱中。

4.壓實。沉降完成後，加入更多的石油醚，用雙聯球或氣泵加壓，直至流速恆定。柱牀約被壓縮至9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應進行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時由於柱牀萎縮產生開裂。

5.上樣。幹法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣後，加入一些洗脱劑，再將一團脱脂棉塞至接近硅膠表面。然後就可以放心地加入大量洗脱劑，而不會沖壞硅膠表面。

6.過柱和收集。柱層析實際上是在擴散和分離之間的權衡。太低的洗脱強度並不好，推薦用梯度洗脱。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收一餾分；1-2g上樣量，50g硅膠（200-300目），20-50ml收一餾分。

7.檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑低1-2個數量級。

8.送譜。收集的產品旋幹，在送譜前通常需要重結晶。如果樣品太少或為液體，可過一小凝膠柱，作為送譜前的最後純化手段。可除去氫譜1.5ppm左右所謂的“硅膠”峯。

1.先根據TLC方法篩選好洗脱劑，使兩相鄰物質Rf值之差最大化

2.將柱子必須裝平整、均勻

3.考慮有限柱填料的吸附量

4.可考慮用梯度法分開並洗脱