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瑞氏染色
鎖定
- 中文名
- 瑞氏染色
- 外文名
- Wright ' s stain
- 又 稱
- 美藍-伊紅Y
- 本 質
- 染色劑
瑞氏染色理化原理
瑞氏染料是由鹼性染料美藍( Methvlem blue )和酸性染料黃色伊紅( Eostm Y )合稱伊紅美藍 染料即瑞氏 (美藍-伊紅Y)染料。伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子,無色部分為陽離子,其有色部分為酸性,故稱伊紅為酸性染料。美藍通常為氯鹽是鹼性的,美藍的中間產物結晶為三氯化鎂複鹽,其有色部分為陽離子,無色部分為陰離子,恰與伊紅鈉鹽相反。
瑞氏染色染液配製
瑞氏染色溶劑
( 1 )甲醇使瑞氏染料中美藍( M )與伊紅( E )在溶液中離解,可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而着色。 在配製的瑞氏染液中美藍如放置過久即可氧化而含有天青,美藍天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色,但不能使胞漿染為藍色,多餘 美藍就可以 使胞漿染成藍色,染色主要是化學作用,是離子彼此結合的反應。
瑞氏染液配製:
瑞氏染料 830mg 或 1g
甲醇( AR ) 500ml 或 600ml
先稱乾燥瑞氏染料(事先放入温箱乾燥過夜)放置乳缽內, 用乳棒輕輕敲染料成粉末狀,再研磨至細粉末狀(聽不到研芝麻聲)。加少許甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤而無染料粉粒沉着後,再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮。靜置片刻,將上層液體倒入一清潔儲存瓶內(最好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重複數次,直至乳缽內染料及甲醇用完為止。染料完全轉移至儲存瓶後,搖勻,密封瓶口,室温下避光保存,儲存愈久,則染料溶解、分解就越好,一般儲存 3 個月以上為佳。
瑞氏染色緩衝液
1) 緩衝液作用:染色對氫離子濃度是十分敏感的,據觀察 pH 值的改變,可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。 緩衝液須保持 一定的 pH 使染色穩定, PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ,偏鹼性染料可與緩衝液中酸基中和,偏酸性染料則與緩衝液中的鹼基中和,使 pH 穩定。
2) 緩衝液配製( pH6.4~6.8 ,弱酸性):
配方 1 : 配方 2 :
1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml
1% Na 2 HPO 4 20ml M/15 Na 2 HPO 4 26.5ml
H 2 O( 新鮮 ) 加至 1000ml
置室温黑暗處,瓶口密封,防止黴菌污染,如有污染則應報廢。