引物二聚體

1從引物自身 着手，重新設計引物，這是最根本解決這一問題的辦法;

2.可能模板有問題;模板濃度過小，適當加大模板量;

3.Taq酶，引物，Mg2+濃度可能過高，可 降低它們的濃度;

4.取你所要加的上下游引物混合後，在100攝氏度下的沸水中煮5分鐘，然後迅速拿出至於冰塊之上瞬時冷卻，這時再加入反應體系當中，引 物二聚體就會消失的;理由:引物可能會發生髮夾結構,自身環化等結構,在100攝氏度下的沸水中煮5分鐘可使引物變為單鏈，以減少二聚體。不過有人認為在 PCR儀上95度變性5min也同樣達到目的，而且成功試過通過延長退火時間也可以消除引物二聚體。

5.所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可 以增強特異性;

6.PCR反應體系的配製在冰上進行，最後加TAq酶，PCR結束後，產物勿放置在室温下過長時間，有人認為室温下有些TAQ酶會將多餘的 引物合成為二聚體。

7.減少循環數;

8.降低退火温度後有條帶，則應逐漸提高温度，若提高温度的同時產物量減少，則考慮增加鎂離子濃度(根據擴增片斷長度 而定，片段長則相應鎂離子濃度應該高一些);

9.若提高退火温度，發現還是隻有引物二聚體，而且鎂離子的濃度在20-25mmol/l沒有區別，則考慮 Buffer等試劑沒有完全融解、混勻，導致吸取的試劑濃度不對。

10.以上次的pcr產物作模板二次pcr，可以提高引物與模板的特異性，減少引物二聚 體，如果兩次時間間隔短的話，可以把原產物稀釋100-1000倍，如果間隔較長可以稀釋50-100倍; ^[1-2]