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密度梯度離心
鎖定
密度梯度離心(density gradient centrifugation)
- 中文名
- 密度梯度離心
- 外文名
- density gradient centrifugation
- 簡 稱
- 區帶離心法
- 缺 點
- 離心時間較長;不易掌握等
密度梯度離心離心原理
密度梯度離心離心法
密度梯度離心法 density gradient centrifugation method
區帶離心法是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區帶的分離方法。此法的優點是:①分離效果好,可一次獲得較純顆粒;②適應範圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降係數差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒;③顆粒不會擠壓變形,能保持顆粒活性,並防止已形成的區帶由於對流而引起混合。
此法的缺點是:①離心時間較長;②需要製備惰性梯度介質溶液;③操作嚴格,不易掌握。
(1)差速區帶離心法:當不同的顆粒間存在沉降速度差時(不需要像差速沉降離心法所要求的那樣大的沉降係數差)。在一定的離心力作用下,顆粒各自以一定的速度沉降,在密度梯度介質的不同區域上形成區帶的方法稱為差速區帶離心法。此法僅用於分離有一定沉降係數差的顆粒(20% 的沉降係數差或更少)或分子量相差3倍的蛋白質,與顆粒的密度無關,大小相同,密度不同的顆粒(如線粒體,溶酶體等)不能用此法分離。
離心管先裝好密度梯度介質溶液,樣品液加在梯度介質的液麪上,離心時,由於離心力的作用,顆粒離開原樣品層,按不同沉降速度向管底沉降,離心一定時間後,沉降的顆粒逐漸分開,最後形成一系列界面清楚的不連續區帶,沉降係數越大,往下沉降越快,所呈現的區帶也越低,離心必須在沉降最快的大顆粒到達管底前結束,樣品顆粒的密度要大於梯度介質的密度。梯度介質通常用蔗糖溶液,其最大密度和濃度可達1.28 g/cm3和60%。
此離心法的關鍵是選擇合適的離心轉速和時間