增強子序列

增強子是指能使和它連鎖的基因轉錄頻率明顯增加的DNA序列。作為基因表達的重要調節元件，增強子序列大多為重複序列，一般長約50bp，適合與某些蛋白因子結合。其內部常含有一個核心序列：（G）TGGA/TA/TA/T（G），是產生增強效應時所必需的。

1981年Benerji在SV40DNA中發現一個140bp的序列，它能大大提高SV40DNA/兔β—血紅蛋白融合基因的表達水平，這是發現的第一個增強子。它位於SV40早期基因的上游，由兩個正向重複序列組成，每個長72 bp。發現的增強子多半是重複序列，一般長50bp，通常有一個8—12bp組成的“核心”序列，如SV40增強子的核心序列是5’—GGTGTGGAAAG—3’。

觀測位於HPV16 LCR序列YY1結合位點上游的組織特異性增強子序列對YY1蛋白的啓動子P97抑制作用的影響。 方法構建帶有不同長度的HPV16野生株、啓動子遠端YY1位點突變株、啓動子近端YY1位點突變株的5′端LCR缺損序列的熒光素酶報導質粒，以及不同長度的近端YY1/SP1重疊結合位點基因工程突變LCR的熒光素酶報導質粒；將各種質粒轉染到人類子宮頸癌細胞系C33A中，檢測在不同LCR序列的控制下對病毒啓動子P97的活性的影響。 結果去除上游增強子序列後，遠端YY1位點突變的P97激活作用完全消失，近端YY1位點突變的P97激活作用部分喪失。不同長度的近端YY1/SP1重疊位點基因工程突變LCR對P97活性的影響不受上游啓動子序列的控制。 結論YY1蛋白對啓動子P97的抑制效應受位於其上游序列的增強子的控制。

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）16型的長控制區（long control region，LCR）為病毒基因轉錄的重要調節區域。在LCR中部有一組織特異性增強子區域，可在上皮細胞內增強病毒早期啓動子P97的活性。增強子是由許多轉錄激活因子的特異性結合位點組成，其中包括有AP1、NF1、Oct1、TEFⅠ等〔1〕。細胞轉錄調節蛋白YY1廣泛存在於上皮細胞胞核內〔2〕，對P97的活性起負性調節作用〔3-5〕。YY1蛋白可通過多種方式對不同的啓動子活性進行正相或負相調節，其機理包括與其它活性蛋白發生蛋白-蛋白間相互作用〔6〕，與其它活性蛋白競爭性結合相應的結合位點〔7〕，通過蛋白與DNA結合引起DNA空間結構的改變〔8〕以及與其它非DNA結合活性蛋白作用後使後者作用於轉錄起始部位〔9〕。

在HPV16 LCR序列上存在有多個YY1特異性結合位點，分佈於增強子和啓動子P97之間。由於增強子是由多個轉錄激活因子結合位點構成，因而有可能會參與YY1蛋白對P97的活性抑制作用。我們構建了不同的HPV16標準序列、啓動子遠端YY1位點和近端位點突變的5′端缺損LCR熒光素酶報道質粒，經轉染細胞檢測發現，在除去增強子後YY1結合位點突變引起的啓動子活性增強效應明顯減弱或消失。這表明YY1蛋白對P97的調節作用有賴於上游的增強子序列。