分段鹽析

對分離目的蛋白的鹽析，最好採用分段鹽析。由於不同的蛋白質其溶解度與等電點不同，沉澱時所需的pH值與離子強度也不相同，改變鹽的濃度與溶液的pH值，可將混合液中的蛋白質分批鹽析分開，這種分離蛋白質的方法稱為分段鹽析法(fractional saltingout)。如半飽和硫酸銨可沉澱血漿球蛋白，飽和硫酸銨則可沉澱包括血漿清蛋白在內的全部蛋白質。

蛋白質是親水膠體，借水化膜和同性電荷（在PH值7.0的溶液中一般蛋白質帶負電荷）維持膠體的穩定性。向蛋白質溶液中加入某種鹼金屬或鹼土金屬的中性鹽類,則發生電荷中和現象（失去電荷）。當鹽類的濃度足夠大時，蛋白質膠粒脱水而沉澱，稱為鹽析。由鹽析所得的頊沉澱，經過透析或用水稀釋以減低或除去鹽後，能再溶解並恢復其分子原有結構及生物活性，因此由鹽析生成的沉澱是可逆性沉澱。各種蛋白質分子顆粒大小、親水度不同，故鹽析所需耍的鹽濃度也不一樣。調節混合蛋白質溶液中鹽的濃度.可使各種蛋白質分段沉澱。球蛋白在個飽和硫酸銨溶液中即可析出，白蛋白則需在飽和硫酸銨溶液中才能沉澱，此法是蛋白質分離純化過程中的常用方法。

蛋白質的分子很大，其顆粒在膠體顆粒範圍（直徑1~100nm）內，所以不能透過半透膜。選孔徑合宜的半透膜，由於小分子物質能夠透過，而蛋白質顆粒不能透過，因此可使蛋白質和小分子物質分開。這種方法可除去和蛋白質混合的中性鹽及其他小分子物質。這種技術叫做透析，是常用來純化蛋白質的方法。由鹽析所得的蛋白質沉澱，經過透析脱鹽後仍可恢復其原有結構及生物活性。 ^[2] 

1. 分段鹽析的條件先需要進行小實驗探索，如：先進行0%-30%的硫酸銨沉澱，再進行30%-60%的硫酸銨沉澱，最後進行60%-80%的硫酸銨沉澱。

2. 每一段鹽析靜置之後都將離心取沉澱，透析並檢測活性。通過實驗結果可以看出哪一段鹽析出來的目的產物最多，相對來説雜質就更少。

3. 比如實驗中的活性物質主要在60%-80%這段出來，在以後的實驗中，就可以首先進行0%-60%的硫酸銨沉澱，這段沉澱物可以拋棄（去除大多數雜質）；然後進行60%-80%的硫酸銨沉澱，這段沉澱出來是物質是所需要的目的物質含量比較高的物質，將其收集進行下一步純化工作 。