凝集效價

凝集素效價的檢測步驟：

（1）倍比稀釋：向“V”型血凝板個孔中加入20μLPBS 緩衝液，然後分別吸取樣品純化試液20μL 加入到“V”型血凝板的第一孔，混合後取出20μL 加入到第二孔，混合後亦取出20μL加入到第三孔，以此類推作倍比稀釋。微微搖動血凝板使其混勻。每孔加入20μL2%血球懸液，血球懸液加畢後繼續搖動1min ，血凝板在室温置放2h。用肉眼觀察凝集反應情況，記錄凝集程度。（n=5）

（2）將凝集程度分為5個等級，從低到高分別以0、1、2、3、4 表示。

4：紅細胞完全凝集，呈一層薄膜片狀，均勻地分佈在整個孔中，且邊緣不整齊。

3：紅細胞大部分凝集，但不成膜狀，周邊有較窄的透明帶，且有未凝集的紅細胞沉澱於孔底成紅色小圓點狀。

2：紅細胞部分凝集，周邊有較寬的透明帶，且有未凝集的紅細胞沉澱於孔底成紅色圓點狀，且相當於空白對照組的50%。

1：紅細胞大部分不凝集，有可見凝集顆粒，未凝集的紅細胞沉澱於孔底成紅色圓形狀。

0：紅細胞完全不凝集，全部沉澱於孔底成大的圓形狀，與空白對照組完全相同。

（3）血凝效價判斷：以能使50%紅細胞凝集的血凝素的最高稀釋倍數作為血凝效價，即上述表示為“2”的凝集程度所對應的稀釋倍數。

（4）樣品凝集素含量計算公式:

C=S0 *f*V/(f0 *W)*100%

式中S0 為標準樣品的濃度，f為待測樣品的凝集效價（如2的多少次方），V為待測樣品溶液的體積（ml），f0 為標準樣品的凝集效價，W為待測樣品質量。

^[1] 

植物凝集素(簡稱PHA)不僅對動物血中的紅血球有一定的凝集作用,而且對血液中的淋巴細胞分裂有一定的刺激作用。而PHA對各種動物血的凝集效價,則是淋巴細胞體外培養中決定PHA適宜加人量的一個重要依據。在培養鹿茸血及靜脈血之前,做了PHA對這些物種的血液的凝集效價測定。採用了從菜豆、雪山豆和商喻中提取的三種PHA。結果發現,不同來源的PHA對同一種鹿血產生凝集作用所需的濃度略有不同;同一種PHA對鹿科不同物種的血的凝集效價也有不同,對起源越晚的物種,效價越低,這一趨勢十分明顯;在用三種不同來源的PHA試驗時,這一趨勢非常一致。並且在其他動物中,也反映出PHA對進化程度較高的動物,凝集效價較低的趨勢。

PHA是一類蛋白質,它們能夠使紅血球發生凝集,是因為它們能與細胞表面的某一些含酪的受體相結合。不同的PHA對於不同動物的紅血球凝集效價有不同,過去已有人發現,但是,我們的試驗卻表明,PHA對不同動物血的凝集效價,和動物起源早晚與進化程度有關。可以推測,各種動物紅血球細胞膜化學結構分子水平的差異,很可能是影響PHA凝集效價的決定性因素。因此,今後如能對這一現象的生物化學實質進行深人的研究,可對動物的分子進化學提供一些新的事實。 ^[2]