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shRNA
鎖定
sh
RNA是英文單詞short hairpin RNA的縮寫。翻譯為“短髮夾RNA”。shRNA包括兩個短
反向重複序列。克隆到shRNA表達載體中的shRNA包括兩個短反向重複序列,中間由一莖環(loop)序列分隔的,組成
髮夾結構,由polⅢ
啓動子控制。隨後再連上5-6個T作為
RNA聚合酶Ⅲ的
轉錄終止子。
在活體中輸送“
小干擾RNA”(siRNA)的一種辦法是,將siRNA序列作為“短
髮夾”克隆進
質粒載體中。當送入動物體內時,該髮夾序列被表達出來,形成一個“
雙鏈RNA”(
dsRNA),並被RNAi通道處理。然而,對成年
小鼠肝臟中shRNA的表達的
長期效應所做的一項研究為我們敲響了警鐘。該研究結果表明,很多shRNA在小鼠中表達時是有毒的。這種經常是致命的毒性似乎是由shRNA與內生
微RNA之間為與Exportin-5結合所展開的競爭造成的。Exportin-5是一個參與將分子輸送出
細胞核的因子。人們對開發基於shRNA的療法非常感興趣,而此前幾乎沒有證據表明shRNA在活體中有很強毒性。
- 中文名
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短髮夾RNA
- 外文名
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short hairpin RNA
- 譯 名
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短髮夾RNA
- 包 括
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兩個短反向重複序列
- 實驗載體
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成年小鼠
- 競爭者
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內生微RNA
設計
shRNA真核表達載體pYrbio-LT-1質粒圖譜
[1]
3. Stratagene發現29個寡核苷酸較之原先推薦的23個寡核苷酸可以更有效地抑制
目的基因。
5. ShRNA目的序列的第一個鹼基必須是G以確保RNA聚合酶轉錄。如果選擇的目的序列不以G開頭,必須在緊連
正義鏈的上游加一個G。
6. shRNA插入片段中的莖環應當靠近寡核苷酸的中央。不同大小和
核苷酸序列的莖環都被成功的運用過。其中包含一個獨特的
限制性酶切位點的莖環利於檢測帶有shRNA插入片段的克隆。在比較了眾多不同長度和序列的莖環,5'TCAAGAG3'序列最為有效。
8.在正義鏈和
反義鏈序列上不能出現連續3個或以上的T。這可能導致shRNA轉錄的提前終止。
- 參考資料
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