miRNA檢測

1．Northern雜交

該方法通過將RNA變性及電泳分離後，將其轉移到固相支持物上，從而用於雜交反應，Northern雜交不僅能夠靈敏檢測出RNA的丰度，還能結合RNA marker來檢測RNA的分子大小，這對於排除其他小分子RNA的污染有重要意義。Northern雜交也可用作miRNA的定量分析，只需將已知濃度梯度的寡核苷酸對照物與待測樣品進行平行雜交即可。該方法的缺點是耗時、耗量，一次檢測需要3個工作日，需要5到10微克的總RNA量才能成功檢測出miRNA。

2．微陣點分析

採用高密度的熒光標記探針與RNA樣本雜交，通過熒光掃描獲得表達圖譜，藉助相應軟件進行miRNA的表達分析。由於在設計探針時可以包含所有可用miRNA序列，因此微點陣可以作高通量的miRNA分析。不足之處在於需要足夠的RNA初始樣本，大約為每個微點陣5微克。

3．實時定量PCR

該方法主要是在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析。既可檢測miRNA前體，又可檢測成熟miRNA的表達。與雜交方法相比，實時定量PCR可以高度靈敏地檢測出低丰度表達的靶分子，也常用於miRNA表達譜結果的鑑定。已有新的實時定量PCR的方法，利用莖環狀引物進行miRNA的反轉錄，然後再進行實時定量PCR。

以上三種檢測方法中，Northern雜交法是驗證和確認miRNA的重要方法，但比較繁瑣且靈敏度低，不適於臨牀樣本的高通量檢測；實時定量PCR法是最方便使用且有效的檢測方法。

由於miRNA具有高度特異性、高度保守性，可以提高疾病診斷的準確性和精確度。另外，根據miRNA時序性的變化特點，可以針對患者血漿、血清、尿、唾液中的miRNA表達的變化確定患者疾病的進展情況，並制定相應的個體化治療方案。此外，miRNA檢測對新型生物醫藥製劑的研發也具有重要意義。

從生物學機理上來説，miRNA有成為腫瘤標誌物的優勢，它是腫瘤細胞主動分泌的，隨着腫瘤細胞的生成、凋零，miRNA的表達量一直在變化，所以每種miRNA的表達量代表了在某一刻人類體內健康或者疾病的信息。 ^[1]  MiRXES在人體這2000多種miRNA中，他們找出了與胃癌高度相關的12種miRNA，當人體中出現胃癌細胞時，這12種miRNA在血液中的濃度會出現異常。 ^[2]