star活性

導致Star活性出現的因素包括：低粒子強度、高pH值以及過高的甘油濃度（＞ 5% v/v）。尤其是最後一點，因為一般限制酶生產商提供的緩衝液（buffer）都含有較高的甘油濃度（典型為50% v/v），如果稀釋不充分就有可能導致Star活性的出現。當有一個以上酶切位點時，該問題顯得更加突出。

1. 較高的甘油濃度 （＞5% v/v）。

2. 酶與底物DNA比例過高 （不同的酶情況不同，通常為＞100 U/μg）。

3. 低鹽濃度（小於25 mM）。

4. 高pH值 （pH＞8.0）。

5. 存在有機溶劑 （如DMSO、乙醇、乙烯乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等）。

6. 用其他二價離子替代鎂離子 （如Mn，Cu，Co，Zn等）。 Star活性是內切酶的一種普遍現象，但是大多數可以控制，正常情況下使用提供的緩衝液就不會出現Star活性。

1. 儘量使用較少的酶進行完全消化反應。這樣可以避免過度消化以及過高的甘油濃度。

2. 儘量避免有機溶劑 （如製備DNA時引入的乙醇）的污染。

3. 將離子濃度提高到100～150 mM （若酶活性不受離子強度影響）。

4. 將反應緩衝液的pH值降到7.0。

5. 二價離子使用Mg。