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Sanger法
鎖定
Sanger法即雙脱氧末端終用做止法,測定DNA一級結構
- 中文名
- 雙脱氧末端終用做止法
- 外文名
- Sanger法
- 方 法
- 分成四組分別為ddATP、ddGTP等
- 用 途
- 測定DNA一級結構
雙脱氧末端終用做止法,測定DNA一級結構
原理是採用核苷酸鏈終止劑—2,,3,-雙脱氧核苷酸終止DNA的延長。由於它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3-OH,一旦參入到DNA鏈中,此DNA鏈就不能進一步延長。根據鹼基配對原則,每當DNA聚合酶需要dNMP參入到正常延長的DNA鏈中時,就有兩種可能性,一是參入ddNTP,結果導致脱氧核苷酸鏈延長的終止;二是參入dNTP,使DNA鏈仍可繼續延長,直至參入下一個ddNTP。根據這一方法,就可得到一組以ddNTP結尾的長短不一的DNA片段。
方法是分成四組分別為ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP反應後,聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。
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