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Klenow片段

鎖定
大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ經過枯草桿菌蛋白酶(或胰蛋白酶)處理後,原來的酶分子切成兩個片段,其中大片段分子質量為76kD,小片段分子質量為34kD。該大片段通常稱為Klenow片段,通過克隆技術也可以獲得Klenow片段。 [1] 
Klenow片段,又名大片段(克列諾片段,Klenow fragment,或稱克列諾酶,Klenow enzyme):E.coli DNA聚合酶Ⅰ經胰蛋白酶枯草桿菌蛋白酶部分水解生成的C末端605個氨基酸殘基片段。該片段保留了DNA聚合酶I的5ˊ→3ˊ聚合酶和3ˊ→5ˊ外切酶活性,但缺少完整酶的5ˊ→3ˊ外切酶活性。DNA聚合酶 I(DNA-pol I)斷開後的存在另一個323個氨基酸殘基片段,保留5ˊ→3ˊ外切酶活性。
中文名
Klenow片段
外文名
Klenow fragment
發現時間
1970年
發現者
漢斯·克列諾

Klenow片段功能作用

Klenow片段常用於cDNA第二鏈合成,雙鏈DNA 3ˊ-末端的標記等。 [2] 
大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段是完整的DNA聚合酶Ⅰ的一個片段,只有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性,失去了5’→3’外切酶活性。它可用於填補DNA單鏈末端成為雙鏈
如果供給32P標記的三磷酸核苷酸,則可使DNA帶上同位素標記。當用交錯切割限制酶切成帶有單鏈粘性末端的DNA片段,要用被切成平頭末端的DNA片段連接時,可以先用Klenow片段使粘性末端的單鏈補齊成為平頭,然後在DNA連接酶作用下把兩個DNA片段連接起來。

Klenow片段發現過程

是漢斯·克列諾於1970年用枯草桿菌蛋白酶(subtilisin)處理大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ時,得到的兩個片段中分子量較大的一個。
參考資料
  • 1.    賀淹才.基因工程概論:清華大學出版社,2008
  • 2.    吳士良,賈弘禔.生物化學第7版:人民衞生出版社,2009年5月第7版:353