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DAPI

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DAPI，即4',6-二脒基-2-苯基吲哚，是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料，常用於熒光顯微鏡觀測。因為DAPI可以透過完整的細胞膜，它可以用於活細胞和固定細胞的染色。
中文名
DAPI
外文名
4',6-diamidino-2-phenylindole
別    名
4',6-二脒基-2-苯基吲哚
分子式：
C16H15N5
分子量：
277.324
CAS登錄號
47165-04-8
密    度
1.41 g/cm³
水溶性
微溶

目錄

  1. 1 簡介
  2. 2 歷史
  3. 3 熒光屬性
  4. 4 活細胞毒性
  5. 5 替代

DAPI簡介

DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料，常用於熒光顯微鏡觀測。因為DAPI可以透過完整的細胞膜，它可以用於活細胞和固定細胞的染色。 [1] 

DAPI歷史

1971年DAPI在一項關於制抗錐蟲病的藥物的研究中第一次被合成於OttoDann的實驗室。它雖然不是一種成功的藥物，但更深入的研究表明它與DNA強力結合並在此時發出更強的熒光，這導致了1975年它被用在超速離心分析法中以標記線粒體DNA。與DNA結合時激發的強熒光使它被廣泛用於熒光顯微鏡技術中對DNA的染色。上世紀70年代末證實DAPI可以被用來在植物，微生物，多細胞動物和細菌細胞中追蹤DNA，1977年證實它可以被用來定量給細胞中的DNA染色，同時也證實DAPI可在流式細胞術中用作DNA染料。 [1] 

DAPI熒光屬性

當DAPI與雙股DNA結合時,在熒光顯微鏡觀察下，DAPI染劑在358nm(紫外線)處有一個最大吸收峯，並在461nm(藍)處有一個最大發射峯，其發射光的波長範圍含蓋了藍色至青綠色，因此在熒光顯微技術中DAPI被紫外線照亮且被藍或青色濾鏡檢出。DAPI也可以和RNA結合，但產生的熒光強度不及與DNA結合的結果，其發射光的波長範圍約在400nm左右。 [1] 

DAPI活細胞毒性

DAPI可用於固定細胞染色，但是因為活細胞染色對DAPI濃度有嚴格要求，它很少被用於活細胞染色。DAPI能快速進入活細胞中與DNA結合，因此DAPI對生物體而言，也被視為一種毒性物質與致癌物。然而在MSDS中它被標記為無毒。儘管DAPI沒有顯現出對E.coli的誘變性，它在機器製造商提供的信息上被認為是一種DNA誘變劑。由於DAPI可以摻入DNA螺旋中，它很有可能有底層的DNA誘變性，因此應小心配置和使用DAPI。 [1] 

DAPI替代

類似於DAPI技術，赫斯特染色是一種既可以用於活細胞也可以用於固定細胞的藍色熒光染料，並且可以使用與DAPI相同的機器濾鏡設置。 [2] 
參考資料
  • 1.    Zink D, Sadoni N, Stelzer E. Visualizing Chromatin and Chromosomes in Living Cells. Usually for the live cells staining Hoechst Staining is used. DAPI gives a higher signal in the fixed cells compare to Hoechst Stain but in the live cells Hoechst Stain is used.. Methods. 2003, 29 (1): 42–50. PMID 12543070. doi:10.1016/S1046-2023(02)00289-X.
  • 2.    Kapuscinski J. DAPI: a DNA-specific fluorescent probe. Biotech Histochem. September 1995, 70 (5): 220–33. PMID 8580206. doi:10.3109/10520299509108199.