CD33

其胞內區含有免疫酪氨酸抑制基序（ITIM），所以它可能具有通過募集信號分子來調節細胞的生長與分化等功能。

CD33在90%以上的急性髓系白血病患者都有表達。在造血幹細胞表面沒有表達,在成熟的粒細胞和其他組織也沒有表達,因此CD33成為髓系白血病治療的良好靶點。

有文獻證實AML細胞表面免疫共刺激分子CD80表達低下或缺乏，是導致白血病細胞不能被機體細胞毒性T細胞（CTL）有效地識別殺傷,從而逃逸宿主免疫監視的重要原因之一，而T細胞也因缺乏第二信號而無能。因此可以利用CD33表面抗原作為AML白血病細胞的表面標記，構建CD80胞外區-抗人CD33單鏈抗體（ExCD80-CD33scFv）融合基因、表達融合蛋白，通過融合蛋白中抗人CD33scFv將CD80胞外區結合到AML白血病細胞表面，刺激腫瘤特異性CTL細胞活化，從而增強抗腫瘤免疫。

構建及表達抗人CD33單鏈抗體（CD33scFv）基因，並檢測其生物活性；擴增CD80胞外區，構建ExCD80-CD33scFv融合基因，並在大腸桿菌中表達融合蛋白，進一步檢測融合蛋白的生物活性。

HIM3-4是血研所研製的分泌鼠源性抗人CD33單克隆抗體的雜交瘤細胞，並已獲得國際人類白細胞分化抗原協作組會議正式命名。我們利用RT-PCR技術分別克隆了抗人CD33單克隆抗體HIM3-4的輕、重鏈可變區基因,並利用短肽（Gly4Ser）3作為linker,通過overlap PCR方法組裝成抗人CD33scFv。將獲得的抗體基因克隆到具有強啓動子的PET28a（+）載體上,應用IPTG誘導表達，純化的表達產物經證明具有與靶抗原人類CD33特異結合的能力。CD80 DNA序列由王敏教授惠贈，我們通過另行設計帶所需酶切位點的引物來擴增CD80胞外區,在此基礎上，利用人血清白蛋白（HAS）第三結構域親水性的403-427位氨基酸作為鏈間連接肽將抗人CD33單鏈抗體及人類細胞表面抗原CD80胞外區基因分別經酶切、純化後克隆至原核表達載體PET22b（+）中,經IPTG誘導，在大腸桿菌內獲得了融合蛋白的表達。融合蛋白的成功構建與表達，為下一步探討血液腫瘤的免疫治療機制奠定了基礎。結果:1.通過RT-PCR方法，利用通用引物從HIM3-4雜交瘤細胞中克隆了抗體輕、重鏈可變區基因，分別為321bp和366bp，我們利用（GGGG）3為連接肽構建了抗人CD33基因工程單鏈抗體，並在PET28a（+）中得到表達,蛋白大小約為31KD,經復性後具有與人CD33結合活性。2克隆出CD80胞外區序列,大小為633bp。3利用大小為25Aa的鏈間鏈接肽,將CD80胞外區與CD33ScFv連為融合表達基因,並在PET22b（+）中得到表達,蛋白大小約為55KD,經復性後具有與人CD33抗原結合活性。