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鞭毛染色法
鎖定
鞭毛的有無、多少和着生方式是細菌鑑定中的重要指標。在一般情況下,細菌的鞭毛因為太細(直徑為10~20nm),故普通光學顯微鏡下無法觀察。但通過特殊染色方法使染料沉積在鞭毛上使其加粗,就可克服上述困難。鞭毛染色方法很多,現介紹常用的3種。
- 中文名
- 鞭毛染色法
- 外文名
- flagella staining
- 細菌鑑定
- 鞭毛的有無、多少和着生方式
- 鞭 毛
- 細菌的鞭毛因為太細
- 原 理
- 特殊染色方法使染料沉積
- 方 法
- 硝酸銀法等
目錄
鞭毛染色法簡介
鞭毛的有無、多少和着生方式是細菌鑑定中的重要指標。在一般情況下,細菌的鞭毛因為太細(直徑為10~20nm),故普通光學顯微鏡下無法觀察。但通過特殊染色方法使染料沉積在鞭毛上使其加粗,就可克服上述困難。鞭毛染色方法很多,現介紹常用的3種。
[1]
鞭毛染色法硝酸銀法
染色操作:一、選用潔淨載玻片。二、配製染料,A液為丹寧酸5g,FeCI3 1.58,蒸餾水100ml,待溶解後,加1% NaOH 1ml和15%甲醛2ml。B液為AgNO32g,蒸餾水100ml。待AgNO3溶解後,取出10ml作回滴用,即向90ml B液中滴加濃氫氧化銨溶液,當出現大量沉澱時再繼續滴加,直至溶液中沉澱剛消失變澄清止。然後用保留的10ml B液小心地逐滴加入,至出現輕微和穩定的薄霧為止(此操作重要!)。在整個滴加過程中要邊滴邊充分搖盪。配好的染色液當日有效,4h內效果最好;三、菌液製備及塗片,取普通變形桿菌(Phote。oulgaris)等運動力強的菌種,在合適培養基上連續移種幾代,然後取用幼齡菌體制成懸液,在37℃温箱放置10min,使鞭毛鬆開。挑取懸液於玻片一端,傾斜玻片,使菌液慢慢流向另一端,用吸水紙吸取多餘菌液後,氣幹;四、染色,先滴A液,染4~6min後用蒸餾水充分洗淨,再滴B液,在微火上加熱0.5~1 min(不使乾涸),最後用蒸餾水洗後自然乾燥;五、用油鏡觀察。結果菌體與鞭毛均呈深褐至黑色。
[1]
鞭毛染色法Leifson氏法(1930年)
配製染料KAl(SO4)2飽和水溶液20ml,20%鞣酸10ml,蒸餾水10ml,95%乙醇15ml,鹼性復紅(95%乙醇飽和溶液)3ml。依次加入後充分混勻,放入試劑瓶中蓋緊(可保存1周)。染色操作:製備良好的塗片;滴加染液,30℃左右放置10Min;自來水洗;在室温下用硼砂美藍(美藍0.18、硼砂1g加蒸餾水100ml配成)復染(也可省略此步);自來水洗淨、氣乾和鏡檢。結果鞭毛紅色,細胞藍色。
[1]
鞭毛染色法Bailey氏鞭毛染色法(1929年)
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