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酶細胞化學技術
鎖定
- 中文學名
- 酶細胞化學技術
- 界
- 細菌界
酶細胞化學技術簡介
酶細胞化學技術(enzyme cytochemistry)
酶的細胞化學反應包括兩個反應: 第一反應是酶作用於底物的反應, 稱酶反應,形成的產物稱為初級反應產物;第二反應是捕捉劑與初級反應產物的作用,稱捕捉反應,產生最終反應產物:
┌────酶的細胞化學反應─────┐
│ 酶+條件 初級 捕捉劑 │
底物──→反應產物──→ 最終反應產物
(酶反應) (捕捉反應)
酶細胞化學技術實驗方法
酶細胞化學技術樣品製備
酶細胞化學的一個重要問題是既要保存好細胞內酶的活性,又要保存好細胞的結構,因此選擇適當的固定劑種類、濃度、固定的方式和時間是細胞化學技術的一個關鍵問題。光鏡樣品固定多選用中性福爾馬林或多聚甲醛,4℃、24小時,常規的石蠟包埋切片可以滿足相當一部分酶的細胞化學要求;電鏡樣品固定通常用0.5~2%戊二醛或4%多聚甲醛,4℃、2小時,再切成5~100μm的厚片用於細胞化學反應,反應後經常規的鋨酸後固定,脱水、包埋、超薄切片、至電鏡下觀察。冷凍切片能較大限度地保存酶的活性,因此是光、電鏡酶細胞化學技術中常用的方法。
酶細胞化學技術酶細胞化學反應
酶細胞化學反應實際上就是孵育反應的過程,孵育液的成分主要有酶的底物、捕捉劑,保證孵育液pH的緩衝液以及有關的添加劑等。孵育的温度和時間可根據不同的酶和組織通過實驗而確定。電鏡酶細胞化學的樣品在孵育反應後需經鋨酸後固定、梯度乙醇脱水、環氧樹脂包埋和超薄切片,至電鏡下觀察。
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