致畸試驗

致畸試驗是指應用試驗動物鑑定外來化合物致畸性的標準試驗。是通過在致畸敏感期（器官形成期）對妊娠動物染毒，在妊娠末期觀察胎仔有無發育障礙與畸形來評價受試物，包括在我國生產和銷售的一切食品原料及食品用產品的致畸性評價 ^[2]  。

通過致畸試驗可檢測受試物導致胚胎死亡、結構畸形及生長遲緩等毒作用。常用大鼠或小鼠，性成熟的試驗動物進行交配，以雌鼠陰道發現陰栓或塗片發現精子為受孕0天，將孕鼠隨機分組。通常設3個劑量組和1個對照組，每組20只孕鼠。高劑量組應使母鼠產生明顯的毒性反應，但母體死亡率不應超過10%；低劑量組應無明顯的毒性反應。於胚胎髮育的器官形成期（大鼠為受孕第6-15日，小鼠為受孕第5-14日）給以受試物。於自然分娩前1-2日，剖腹取出子宮內胎仔，記錄活胎、死胎及吸收數，檢查活胎仔的外觀、骨骼及內臟畸形。對處理組以母體數為單位計算母體畸胎髮生率，以胎仔數為單位計算胎仔畸形率和單項畸形率，並與對照組進行比較 ^[1]  。

選擇一批發育良好的初成年雄鼠和雌鼠，按比例同籠交配。當雌鼠陰道口有陰栓或在陰道粘液中檢出精子時，便可確定雌鼠受孕的確切日期。然後將受孕雌鼠，以每組10～20只分成各試驗組，同時另設對照組。

給各實驗動物的受試物，一般以亞急性試驗中的最大無作用劑量為高劑量，以高劑量的1/30為低劑量。由於致畸物質在胚胎髮育中的組織分化和器官形成期最能顯現致畸作用，故給予受試物的時間必須恰當，一般應選擇在組織分化和各器官形成期之間。過早將影響受精卵細胞的着牀；過遲則大部分器官已經形成，不能顯現致畸作用。常用受試動物的着牀期、組織分化和大部分器官形成期見表，表內時間從受孕之日起算。

主要檢查外觀畸形、內臟畸形和骨骼畸形三個方面：

①外觀畸形。將胎仔從子宮取出，逐個稱重、測定身長和尾長，評價其發育情況。然後仔細檢查是否出現畸形，包括頭面部和腦、眼、鼻、耳、頜、唇的畸形，四肢和趾的畸形，軀幹和尾部的畸形等。

②內臟畸形。將檢查過外觀的同一窩胎鼠的2/3置於鮑音(Bouin)液中，使組織固定，以檢查內臟畸形;其餘1/3經茜素紅染色後檢查骨骼畸形。將在鮑音液中固定的胎仔標本，用刀片進行各種切面檢查，並與對照組進行比較，分別檢查齶和舌部畸形，眼、鼻和腦部畸形，胸腹部內臟器官的位置、大小和形狀異常等。

③骨骼畸形。把經過乙醇固定的胎仔，除去內臟（或同時剝去皮膚），轉浸入1%的氫氧化鉀溶液中，使肌肉和軟組織完全透明，骨骼清晰可見。再用茜素紅溶液將骨骼染成紅玫瑰色。然後用放大鏡或解剖顯微鏡依次觀察頭顱骨、椎骨、肋骨、尾骨和肢骨，記錄有無缺損、增減、溶合、骨化遲緩等異常。

確定受試物是否有致畸作用，一般是根據各組動物在試驗中出現畸胎的數目和活產胎仔總數所計算的畸胎髮生率；也可根據各組動物活產胎仔中出現畸形的頻數（如一胎仔出現三種畸形，即記錄為三次畸形）所計算的畸形總數，或根據出現畸胎孕鼠數在活產孕鼠總數中所佔的百分率。有時受試動物胎仔的畸形，是以某種或某幾種畸形為主，則應分別計算某種畸形的出現率；然後將各組動物的畸胎髮生率、畸形總數和孕鼠出現畸胎率，進行統計處理,並與對照組進行比較；然後參考着牀數、活胎數、死胎數、吸收胚胎數以及活產胎仔平均體重、身長和尾長等指標進行綜合評定。環境污染物的致畸作用，除與環境污染物本身特性有關外，還與受試動物的選擇、給予受試物的時間、劑量和方式等有關。因此，有時應重複試驗，或對兩種不同品系的動物同時進行試驗，才能得出正確結論 ^[1]  。

致畸作用是指藥物在並不損害母體的情況下引起胚胎和胎兒的發育障礙。包括出生前或產時死亡、畸形、生前或生後生長髮育遲緩、生後功能異常等等。胚胎的器官發生期(受精後3周～3月)是對致畸藥物最敏感的時期，損害狀況由於藥物種類、劑量和受影響器官的不同而有差異。其作用機制，可為對胎兒的直接毒性，胎兒代謝改變及內分泌平衡失調，也可為對母體營養、生化或內分泌情況的影響，以及對胎盤的影響 ^[3]  。致畸作用具有較顯著的種屬差異，對動物有致畸作用的物質，不一定對人類有致畸作用。但致畸作用畢竟是化學物質毒性的一種表現，因此，凡對動物有致畸作用的物質，一般應儘量使其不與人特別是孕婦接觸。