
- 中文名
- 细胞培养基
- 组 成
- 氨基酸等
- 类 别
- 无蛋白培养基等
- 必需的溶液
- 平衡盐水等
基本介绍
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动物细胞培养必需的溶液
抗抹促坑生素溶液:
常用的动物血清主要有牛血清和马血清。牛血清分为胎牛血清和犊牛血清,前者来源少,价格高;后者要求刚产下尚未寒询哺乳的小牛,因为哺乳后的小牛血清中可能含有更复杂的成分。血清中已知的成分主要有蛋白质嘱记、氨基酸、葡萄糖、激素等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋白。
氨基酸是细胞合成蛋白质的基本成分,氨基酸中有12种是细胞本身不合成的,必须由培养液提供。激素有胰岛素、生长激素和多种生长因子如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、增殖刺激因子(MSA)、类胰岛素生长因子(IGFl、IGF2)等。
水解乳蛋白、胶原是另外两种较好的天然培养基成分。水跨市踏解乳蛋白是乳白蛋白的水解产物,呈蛋黄色粉末状,富含氨基酸。一般配制成0.5%溶液,微酸性。胶原是从动物真皮中提取的,具改善细胞表面特性促使其附着生长的作用。
1951年厄尔开发了供动物细胞体外生长的人工合成培养基(MEM)。合成培养基的种类相当多。合成培养基成分已知,便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比,有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所嘱悼替代,因此,细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分,以克服合成培养基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。
动物血清成分复杂,各种生物大小分子混合在一起,有些成分至今尚未搞清楚。血清对细胞生长很有效,但后期对培养产物的分离、提纯以及检测造会成一定困难。另外高质量的动物血清来源有限,成本高,限制了它的大量使用。
组成及作用
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氨基酸
组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异,但有几种氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡 [1]。
维生素
脂溶性维生素如:A、D、E、K。
许多维生素参与构成各种酶的活性基团的成分,没有它们,酶便没有活性,代谢活动将无法进行。
碳水化合物
无机离子
培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外,通过提供钠,钾和钙离子,帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素, 细胞通常可耐受260mOsm/kg −320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意:向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压,特别是溶于强酸或强碱中的物质。
Na+是细胞外液中最主要的阳离子,对维持渗透压的恒定有决定性的作用。K+主要分布在细胞内液,细胞内K +的对于激活某些酶是必需的,它在调节细胞内环境的酸碱平衡也有极重要意义。Ca2+ 在细胞外液中的作用是将组织内部细胞之间相互粘着,在细胞内参与许多重要的细胞生理活动,如传导、参与肌肉细胞收缩等。Mg2+ 是构成细胞间质的重要成分,对于细胞间相互稳定结合有很重要的意义。磷的化合物对细胞物质代谢和生理功能调控的功用是十分广泛而不可缺少。
发展趋势
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无血清培养基
(2)性能更一致;
(3)容易进行纯化和下游加工;
(4)提高制品安全性和/或产量。
培养基中没有添加蛋白,但仍然可能包含一些动物或植物来源的成分(如低分子量肽的各种水解物)。
化学限定培养基
培养基的品质鉴定
外观
颜色、粉末细度须均匀。
培养基完全溶解,可以避免培养基内营养成分的流失。
pH值
水分
培养基的营养成份很丰富,利于微生物的滋长,因此水分的含量控制可以延长有效期。
冰点渗透压
细胞生长试验
可检查细胞培养基是否有促生长的能力,以及是否有不利细胞生长的毒素。
为满足生物制品细菌内毒素的控制要求,作为生物制品生产原料的培养基同样需要细菌内毒素控制。
稳定性
一致性