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福爾根反應

鎖定
專一顯示DNA的一種染色法。標本經水解去掉RNA後,DNA的嘌呤—脱氧核糖糖苷鍵中的嘌呤被酸水解,暴露出了脱氧核糖醛基,遊離的醛基同Schiff‘s試劑反應,呈紫紅色。
中文名
福爾根反應
作    用
顯示DNA
類    別
染色法
呈    現
紫紅色

福爾根反應簡介

福爾根反應 福爾根反應
DNA經弱酸(1mol/L HCl)水解後,嘌呤鹼與脱氧核糖間的糖苷鍵被打開,並且使脱氧核糖與磷酸間的磷酯鍵斷開,在脱氧核糖的一端形成遊離的醛基。醛基在原位與Schiff(無色品紅亞硫酸溶液)試劑結合,形成紫紅色化合物,使細胞內含有DNA的部位呈紫紅色陽性反應。紫紅色的產生是因為反應產物的分子內有醌基(醌基是一個具有顏色的髮色團),所以凡含有DNA的部位,就呈紫紅色。而RNA用此法處理後則分解。 [1] 

福爾根反應Unna染色法

Unna染色法 Unna染色法
1899年Pappenheim 首創了甲基綠-哌洛寧(mehtyl-green-pyronim)染色法。1902年Unna對這一方法進行了改良。 1940年Brachet研究證明用甲基綠—哌洛寧對DNA和RNA有選擇性的染色效果。鹼性的甲基綠-哌洛寧
混合染料處理細胞後,由於DNA、RNA對染料具有的親和力不同,而使這兩種染料對兩類核酸具有了選擇性。 DNA被甲基綠染成綠色,RNA被哌洛寧染成紅色,這樣就能使細胞中兩種核酸分佈顯示出來。 [1] 

福爾根反應實驗例子

福爾根反應材料

Carnoy固定液 Carnoy固定液
洋葱根尖, 洋葱鱗莖表皮細胞

福爾根反應試劑

1)Carnoy固定液: 無水乙醇:冰醋酸 = 3:1
2)95% 乙醇
3)70% 乙醇: 95% 乙醇 70mL 加水 25 mL
4) 5% 三氯乙酸(TCA):固體TCA 5g,加水溶解到100 mL。
5) 1N HCl (當量鹽酸)
6) Schiff 試劑:煮沸200mL 水,稍冷放入1g 鹼性品紅,充分攪拌有助溶解,50℃時過濾,置磨口棕色瓶內,向濾液中加1N HCl 20mL ,待25℃時加亞硫酸氫鈉或亞硫酸鉀 1g ,蓋嚴放暗處,靜止勿動,幾天後,紅色稍退,溶液呈無色或淡黃色,即可使用,如有紅色,可加一勺活性炭,振盪過濾,黑布罩好。
7) Unna 染色液(甲基綠-哌洛寧G)
溶液A: 5% 哌洛寧G 水溶液 17.5 mL
2% 甲基綠水溶液 10 mL
蒸餾水 250 mL
溶液 B:0.2mol/L 的pH為4.8的 醋酸鹽緩衝液。配法:先將1.2mL 醋酸液用水稀釋到100mL,再將2.7g的醋酸鈉用水稀釋到100mL,然後將醋酸和醋酸鈉兩液按77mL和100mL的比例混合。
在應用前,把A液和B液按等量混合,混合液可以保存一週時間,時間長效果不佳。 [1] 
參考資料
  • 1.    王林.《生物細胞學》:人民衞生出版社,2007