生物樣品

1、代表性

選擇一定數量的能符合大多數情況的植株為樣品。採集作物或蔬菜時，不要選擇田埂邊上及離田埂2m範圍以內的樣品；如採集水生植物，則應注意離開污水排放口適當距離。

2、典型性和適時性

採樣的部位要能充分反映所瞭解的情況，這就是典型性。而適時性是根據研究的目的和環境污染物對植物的影響，必須按照植株的生長狀況，發育階段以及植株的不同部位，如根、莖、葉和果實或具體要求進行分別採樣。為了植株同一部分進行比較分析，不能將植株的上、下部位隨意混合。

1、採樣前的準備工作

採樣前應預先準備好採集工具，如小鏟、枝剪、剪刀、布和塑料袋等，還有標籤、記錄本、樣品採集登記表等物品。

2、樣品採集量

樣品採集量主要是考慮樣品部位處理後的代表性及是否夠測定用。為了保證足夠的數量，一般要求至少有20~50g幹樣品，最好有1kg幹樣。如果是新鮮的樣品，以含80%~90%的水分來計算，要比干樣量多5~10倍，最好5~10kg。總之應以不少於0.5kg新鮮樣品為原則。對水生植物、水果、蔬菜等含水量高的植物，採樣量還需酌情增加。

3、樣品的採集在已選好的樣區做成樣方，草木及農作物樣區為1m×1m，灌木植物2m×2m，禾木羣落10m×10m。在樣方區內選擇優勢種的植物分別採集根、莖、葉。對於農作物、蔬菜及草本植物，在各樣區內採5～10個樣品。對於灌木和喬木羣落應該按草木、灌木、喬木分層採樣並編號。在採集測定樣品的同時，對優勢種還應採集標本以作簽定植物科、屬之用。

一般在各採樣小區內採集一個代表樣品，此代表樣品是在這塊地中分散於5~10處，採取5~10個樣品混合組成的。採樣點的佈置方法以梅花形五點取樣，或在小區內平行前進以交互間隔方式取樣，如圖1所示。 ^[1] 

4、樣品的保存

將採集好的樣品裝入布口袋，並附上編寫好樣品號的標籤。採集時必須做好野外調查記錄和樣品採集登記表。對一些特殊情況也應進行記錄，以便查對和分析數據時參考。採集好的樣品應儘快送往實驗室，運輸時要注意通風乾燥，以防樣品發黴腐爛，最好為冷藏運輸。用四分法或八分法選取樣品。用新鮮樣品進行檢測時，應立即送往實驗室，充分洗滌、搗碎處理和檢測。如當天難以處理，鮮檢樣品應該暫時冷藏在冰箱內。其餘樣品可在通風乾燥處晾乾，去掉灰塵、雜物、脱殼、磨碎，通過1mm篩孔，儲存在磨口廣口玻璃瓶中備用。

動物的各部分組織均可以分別作為採集對象，但通常是用尿、血液、毛髮和指甲等。

1、動物的血液

動物一般多用耳緣靜脈取血，先去毛，要去淨毛，不傷皮膚，用體積分數為75%的酒精擦動物耳朵，例如兔耳朵，用燈泡照射加熱使其血管充血，用大頭針刺破靜脈放血（先從遠心端刺），將血液放入抗凝杯中，邊收集邊搖勻，以防凝固。

2、動物的尿液

為收集動物的尿液，可將動物放在代謝籠中，使動物的尿液可經下漏斗流入採樣瓶中。一般晨尿濃度較高，可一次收集，也可收集2h甚至24h的尿液。

3、 頭髮和指甲

頭髮作為樣品的主要優點是：採樣時受檢者無痛、無創傷。樣品容易貯存和運送，不需特殊容器；樣品不易變質，可長期保存等。

在生物樣品的測定中，根據測定項目的不同，首先要經過消解（或灰化），或提取和分離等處理工作，然後才能進行待檢組分含量的測定。處理生物樣品的方法有消解法 （又稱濕法氧化或消化法，主要有硝酸-硫酸消解法、硝酸-高氯酸消解法、硫酸-過氧化氫消解法）、灰化法 （又稱燃燒法或高温分解法）、提取法（包括振盪提取、組織搗碎、索氏提取器提取）、分離法和濃縮法。 ^[2] 

1、新鮮樣品的製備

測定植物樣品中易轉化或易降解的即易起變化的物質（如酚、氰、有機農藥等）及多汁的瓜果、蔬菜樣品，應在新鮮狀態下進行測定。製備這些樣品時，先將各平均樣品用清水、去離子水（或重蒸餾水）洗淨（受大氣污染的樣品還應先用洗滌劑洗），並用乾淨紗布輕輕擦洗。然後切碎、混合均勻。如蔬菜樣品可稱取100g放入電動搗碎機的搗碎杯中，加同樣質量的蒸餾水或去離子水，含水分多的樣品也可以不加水（如熟透的西紅柿），含水少的樣品可加兩倍於樣品的水。待檢樣品按實際質量稱量。打碎製成均勻漿狀。含纖維較多或較硬的樣品，如禾本科植物莖稈、葉子等，不能用搗碎機搗碎，可用不鏽鋼刀或剪刀切成小碎塊或碎片，混合均勻備測定用。

2、烘乾樣品的製備

用幹樣進行檢測的樣品通常要經過如下處理：

（1）清除污物

任何灰塵、泥土、肥料、農藥等沾污物均會影響測定結果的準確性，所以必須在烘樣前擦刷或用清水、0.1%～0.3%的去污物劑和去離子水等清除樣品上的污物，清洗的操作必須迅速，以免溶液和樣品長時間接觸而引起某些成分如鉀、鈣的損失。

（2）樣品的烘乾

經擦淨或洗淨的樣品，如果不用鮮樣進行測定，最好儘快在鼓風乾燥箱（或在低温真空乾燥箱中）烘乾，以防發黴變質，並減少化學和生物的變化。烘乾時要注意適宜的温度，温度過高時，會引起易揮發元素的損失。

（3）樣品的研磨

為使樣品的組成更為均勻和易於處理，須將烘乾的樣品進行研磨粉碎並混合均勻，穀類的果實樣品須先脱殼再進行粉碎。

用於測定金屬元素的樣品，研磨時應注意金屬器械對樣品的污染問題，如測定樣品中的鉻等含量時，不能用鋼製粉碎機，而用玻璃研缽碾碎，過篩最好用尼龍篩，否則會有錳、鎳等元素的污染。總之，在測定樣品中的微量元素時，最好是使用瑪瑙研缽研碎，以免因再次受到污染引起誤差。粉碎磨好的樣品儲存於聚乙烯瓶或磨口廣口玻璃瓶中備用。

1、血、尿待檢樣品的製備

（1）全血的製備

環境生物測定中所用的全血是抗凝的全血，即在取出人（或動物）的血液後，必須立即與適量的抗凝劑充分混合，以免血液凝固。為了使血液注入容器後均勻的與抗凝劑接觸，必須使抗凝劑能在容器底部鋪成薄層，這可在烘乾時轉動容器來實現。取血量為數毫升時一般用試管儲血。用上述方法準備的加有抗凝劑的試管稱為抗凝試管。

（2）血漿的製備

環境生物污染測定中所用的血漿也是抗凝血漿。製備方法是將抗凝血在離心機中離心，使血細胞下沉，這樣所得的上清液即為血漿。在血漿製備過程中應防止溶血，故要求採取血液時所用的注射器、針頭等都需清潔乾燥，取得全血後也要避免劇烈震動。

（3）血清的製備

血清是指血液凝固後自行析出的液體。製備血清的方法是採取血液，不加抗凝劑，在室温下使其凝固，通常經3h後血塊收縮析出血清，離心分離，吸取上清液即為血清。製備血清也要防止溶血，故所用設備必須乾燥，且在血塊收縮後及早分出血清。

（4）無蛋白質血液的製備

在環境生物污染測定中有時須避免蛋白質的干擾（常與試劑發生渾濁或沉澱），常用沉澱蛋白質的試劑除去血液中的蛋白質，而保留應測定的化學成分，這種操作稱為無蛋白血液的製備。無蛋白血濾液的製備應根據具體檢測要求來選擇沉澱蛋白質的試劑。

2、動物組織和器官待檢樣品的製備

離體不久的組織在適宜的温度和pH值條件下，可以進行一定程度的物質代謝。所以在生物測定中，常利用離體組織製成不同的組織樣品，用來研究生物化學變化。常用的組織製品有：組織糜、組織勻漿、組織提取液。

（1）組織糜：將新鮮組織用剪刀迅速剪碎，再與砂及適當的緩衝液磨碎或用絞肉機絞成糜狀。

（2）組織勻漿：新鮮組織稱量後剪碎，加入適當的勻漿製備液，用高速組織搗碎機攪碎組織而製成勻漿。如果組織量較少，可在剪碎組織後用組織勻漿器磨成勻漿。

（3）組織提取液　將組織勻漿經過細紗布過濾的液體或經離心去沉澱後的上清液，即為組織提取液。 ^[3]