-
瑞氏染液
鎖定
- 中文名
- 瑞氏染液
- 外文名
- Wright's stain
- 溶 於
- 甲醇
- 所屬類別
- 複合染料
瑞氏染液使用方法
2.用甲醇作瑞氏染料溶劑,即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑,有兩種作用:
(1)甲醇使瑞氏染料中美藍(M)與伊紅(E)在溶液中離解,可使細胞成分選擇性吸附其中的有色物質而着色。
甲 醇
ME(瑞氏染料)----→M+ + E-
瑞氏染液染液配製
(1) 瑞氏染液配製:
瑞氏染料 830gm或1g
甲醇(AR) 500ml或600ml
○先稱乾燥(事先放入温箱乾燥過夜)瑞氏染料放置乳缽內,用乳棒輕輕敲碎染料成粉末,再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細粉末,加少許甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤,而無染料粉粒沉着。
○再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮,靜置片刻,將上層液體倒入一清潔儲存瓶內(最好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重複數次,至乳缽內染料及甲醇用完為止,搖勻,密封瓶口。
○存室温暗處,儲存愈久,則染料溶解、分解就越好,一般儲存3個月以上為佳。
(2) 緩衝液:
●緩衝液作用:
○緩衝液須保持一定的pH使染色穩定,PBS的pH 一般在6.4~6.8,
瑞氏染液緩衝液配製
(pH6.4~6.8,弱酸性):
配方1 : 配方2:
1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H2O(新鮮) 加至1000ml
置室温黑暗處,瓶口密封,防止黴菌污染,如有污染則應報廢。
姬姆薩(Giemsa's stain;天青-伊紅)染色
1.姬姆薩染料是伊紅(AzurII Eqsin)和天青(藍)2號合成的。
2.姬姆薩染料( Giemsa, 天青-伊紅)染液配製:
姬姆薩染料(粉末) 0.5g或7.5g
甲醇(AR) 33ml 或500ml
甘油(AR) 33ml或 500ml
●先將姬姆薩染料放入乳缽中,逐漸倒甘油研磨溶於甘油中,置於56℃水温箱內,90~120分鐘,然後加入甲醇,搖勻後放置數天,過濾後或不過濾即可使用。此染液放置室温陰暗處,時間越長越好。
●使用染液可臨時配置:姬姆薩染液1ml,加DDH2O10ml混勻。即可使用。
瑞氏染液染色步驟
(1)先用甲醇固定2~3分鐘。
(2)將血或骨髓塗片放置姬姆薩使用液15~30分鐘。
(3)塗片用自來水沖洗,在室温中乾燥待查。
瑞氏染液染液鑑定
瑞氏或姬姆薩染色液鑑定:剛配好或放置一個月以上的染液可進行下列鑑定:
1.取1滴染液於乳白玻板上,自行迅速擴散開,其顏色變紫紅色,且有偽足形成。
2.取1滴染液加1滴緩衝液,染液由深藍色立即變為紫紅色。
3.取血片或骨髓片進行試染檢查,觀察染色後各類細胞的胞核、胞漿及顆粒着色情況,pH是否合適及染色合適時間。如有上述變化,表明染液合格,可供使用。
瑞氏染液混合染色
瑞氏染色(Wright's)-姬姆薩(Giemsa's)混合染色:
●故採用以瑞氏染液為主,姬姆薩染液為輔的混合染色。
染色步驟:
1. 先用瑞氏染液將塗膜面充分覆蓋;
2. 稍等片刻再加姬姆薩染液2-3滴加減(根據塗片上細胞多少及增升程度酌情而定);
4. 染色30-40分鐘;
5. 分色:用自來水緩緩衝洗至少3分鐘以上,待幹,勿用濾紙吸乾,以免濾紙纖維污染塗片。
[1]
- 參考資料
-
- 1. 瑞氏染液配製、使用方法及注意事項 .百度文庫[引用日期2019-08-28]