玻片凝集試驗

凝集反應是一種血清學反應。顆粒性抗原（完整的病原微生物或紅細胞等）與相應抗體結合，在有電解質存在的條件下，經過一定時間，出現肉眼可見的凝集小塊。參與凝集反應的抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。可分為直接凝集反應和間接凝集反應兩類。玻片法是一種定性試驗方法。可用已知抗體來檢測未知抗原。若鑑定新分離的菌種時，可取已知抗體滴加在玻片上，將待檢菌液一滴與其混勻 ^[1]  。

玻片凝集反應是在載玻片上將細菌等顆粒性抗原與其相應抗體混合，如兩者對應則可發生特異性結合而形成肉眼可見的凝集塊，即為陽性反應；混合後均勻渾濁，無凝集塊出現者為陰性反應。本法可應用於用已知抗體(免疫血清)檢測未知抗原，為定性試驗。主要用於細菌鑑定、分型和人類ABO血型鑑定。本實驗以人類ABO血型鑑定試驗為例。

人類ABO血型抗原有A和B兩種抗原。A型者的紅細胞膜上含有A抗原，B型者的紅細胞膜上含有B抗原，AB型者的紅細胞膜上含有A、B兩種抗原，O型者的紅細胞膜上不含有A、B兩種抗原。分別將抗A、抗B抗體與受檢者紅細胞混合，抗A和(或)抗B抗體與紅細胞表面上的相應抗原結合而引起紅細胞凝集，呈陽性反應，無凝集現象則為陰性 ^[1]  。

直接凝集反應顆粒狀抗原（如細菌、紅細胞等）與相應抗體直接結合所出現的凝集現象。分為玻片法和試管法。數分種後，如出現肉眼可見的凝集現象，為陽性反應。該法簡便快速，除鑑定菌種外，尚可用於菌種分型、測定人類紅細胞的ABO血型等。試管法是一種定量試驗的經典方法。可用已知抗原來檢測受檢血清中有無某抗體及抗體的含量。用來協助臨牀診斷或供流行病學調查研究。操作時，將待檢血清用生理鹽水連續成倍稀釋，然後加入等量抗原，最高稀釋度仍有凝集現象者，為血清的效價，也稱滴度，以表示血清中抗體的相對含量。診斷傷寒、副傷寒病的肥達氏反應（Widaltest）、布氏病的瑞特氏反應（Wright test）均屬定量凝集反應。

間接凝集反應將可溶性抗原（或抗體）先吸附於一種與免疫無關的、一定大小的顆粒狀載體的表面，然後與相應抗體（或抗原）作用。在有電介質存在的適宜條件下，即可發生凝集，稱為間接凝集反應。用做載體的微球可用天然的微粒性物質，如人（O型）和動物（綿羊、家兔等）的紅細胞、活性炭顆粒或硅酸鋁顆粒等；也可用人工合成或天然高分子材料製成，如聚苯乙烯膠乳微球等。由於載體顆粒增大了可溶性抗原的反應面積，當顆粒上的抗原與微量抗體結合後，就足以出現肉眼可見的反應，敏感性比直接凝集反應高得多 ^[1]  。

1．用酒精棉球消毒無名指指端皮膚，待乙醇幹後用無菌採血針刺破錶皮，用毛細吸管取血1一2滴，放入含1ml生理鹽水的小試管中，混勻，即成待檢紅細胞懸液(濃度約為5%)。取血後。應立即用無菌幹棉球壓迫針眼止血。

2．取乾淨載玻片一張，用記號筆分為兩格，並註明A、B字樣。

3．用吸管吸取抗A血清、抗B血清各一滴分別滴於A、B格內。

4．另用吸管取待測紅細胞懸液，於A格和B格內各加一滴。然後輕輕晃動載玻片使抗血清與紅細胞充分混勻。

5．將載玻片放置於實驗台上靜置數分鐘後，在白色背景下觀察凝集情況 ^[2]  。