活菌計數法

活菌計數法又稱間接計數法。直接計數法測定到的是死、活細胞總數，間接計數法測得的僅是活菌數。這類方法所得的數值往往比直接計數法測得的數值小。活菌計數法一般有平板菌落計數、液體稀釋最大或然數法（ most probable number, MPN）測數、薄膜過濾計數法。 ^[2] 

此法是基於每一個分散的活細胞在適宜的培養基中具有生辰繁殖並能形成一個菌落的能力。因此，菌藩數就是待測樣品所含的活菌數。將單細胞微生物待測液經10 倍系列稀釋後，將一定濃度的稀釋液定量地接種到瓊脂平板培養基上培養，長出的菌落數就是稀釋液中含有的活細胞數，可以計算出供測樣品中的活細胞數。但應注意，由於各種原因，平板上的單個菌落可能並不是由一個菌體細胞形成的，因此在表達單位樣品含菌數時，可用單位樣品中形成菌藩單位來表示，即CFU/ml 或CFU/g(CFU 即colony-forming unit ）。 ^[2] 

取定量（ 1 ml）的單細胞微生物懸液，用培養液作定量10 倍系列稀釋，重複3 ～5 次，將不同稀釋度的系列稀釋管置適宣温度下培養。在稀釋度合適的前提下，在菌濃度相對較高的稀釋管內均出現菌生長，而自某個稀釋度較高的稀釋管開始至稀釋度更高的稀釋管中均不出現菌生長，按稀釋度自低到高的順序，把最後3 個稀釋度相對較高的、出現菌生長的稀釋管之稀釋度稱為臨界級數。由3 ～5 次重複的連續三級臨界級數族得指數，查相應重複的最大或然數表求得最大可能數，再乘以出現生長的臨界級數的最低稀釋度，即可測得比較可靠的樣品活菌濃度。 ^[2] 

測定水與空氣中的活菌數量時，由於含菌濃度低，則可先將待測樣品（一定體積的水或空氣）通過微孔薄膜（如硝化纖維薄膜）過濾濃縮，然後把濾膜放在適當的固體培養基上培養，長出菌落後即可計數。

此法可因操作不熟練造成污染，或因培養基温度過高損傷細胞等原因造成結果不穩定。儘管如此，由於該方法能測出樣品中微量的菌數，仍是教學、科研和生產上常用的一種測定細菌數的有效方法。土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽抱與抱子等的數量均可用此法測定。但不適於測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。

除上述兩種常用的計數方法外，還有膜過濾法、比濁法。膜過濾法是當樣品中菌數很低時，可以將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過膜過濾器。然後將濾膜乾燥、染色，並經處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上 ( 或一定面積中 ) 的細菌數；比濁法原理是在一定範圍內，菌的懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可以藉助於分光光度計，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度 (O ． D ． ) 表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性範圍內，否則不準確。微生物計數法，發展迅速，現有多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法。